GEL DE ELECTROFERESIS

Análisis de la Presencia de Organismos
Genéticamente Modificados en Muestras de
Alimentos

Sesión nº 5
Electroforesis en gel de agarosa

M. Somma, M. Querci

WORLD HEALTH ORGANIZATION
REGIONAL OFFICE FOR EUROPE
WELTGESUNDHEITSORGANISATION
REGIONALBÜRO FÜR EUROPA

ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE
BUREAU REGIONAL DE L'EUROPE
ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD
OFICINA REGIONAL PARAEUROPA

Electroforesis en Gel de Agarosa

2

Índice
Sesión nº 5
Electroforesis en Gel de Agarosa

Introducción

3

Principios físicos de la electroforesis en gel de agarosa

3

Componentes de la electroforesis en gel de agarosa

6

Práctica

8

Bibliografía

Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

12

Sesión nº 5Electroforesis en Gel de Agarosa

3

Introducción
La electroforesis en gel es un método que se emplea para separar macromoléculas
en función del tamaño, la carga eléctrica y otras propiedades físicas. El término
electroforesis describe la migración de las partículas cargadas bajo la influencia de
un campo eléctrico. «Electro» se refiere a la electricidad y «foresis», del griego
phoros,significa «trasladar».

Así pues, la electroforesis en gel es una técnica

consistente en aplicar corriente eléctrica a las moléculas para que atraviesen una
placa de gel. La fuerza motriz de la electroforesis es la tensión eléctrica aplicada a
los electrodos en ambos extremos del gel.

Las propiedades de una molécula

determinan la velocidad con que un campo eléctrico puede desplazarlaa través de
un medio gelatinoso.
Muchas macromoléculas biológicas importantes (por ejemplo, los aminoácidos, los
péptidos, las proteínas, los nucleótidos y los ácidos nucleicos) poseen grupos
ionizables y, a un pH determinado, existen en solución como especies cargadas
eléctricamente, sean cationes (+) o aniones (-). Según la naturaleza de la carga
neta, las partículas cargadas migraránhacia el cátodo o hacia el ánodo. Así, por
ejemplo, cuando se aplica un campo eléctrico a un gel con pH neutro, los grupos
fosfato del ADN cargados negativamente lo harán migrar hacia el ánodo
(Westermeier, 1997).
La electroforesis en gel de agarosa es un método normalizado que se utiliza para
separar, identificar y purificar fragmentos de ADN. Se trata de una técnica sencilla y
rápida quepermite diferenciar fragmentos de ADN que no pueden separarse
adecuadamente con otros procedimientos. Por otra parte, el ADN puede localizarse
en el gel tiñendo con una concentración baja de bromuro de etidio, que es un agente
intercalante fluorescente que se utiliza como colorante.
En las siguientes secciones se presentan los principios físicos, los componentes
(matriz de gel, tampón, tampón decarga y marcador) y los procedimientos para
preparar la electroforesis en gel de agarosa (Sambrook et al., 1989).

Principios físicos de la electroforesis en gel de agarosa
La electroforesis en gel es una técnica que se emplea para separar los ácidos
nucleicos y las proteínas. La separación de las macromoléculas depende de dos
variables: carga y masa. Cuando una muestra biológica, como porejemplo el ADN,
se mezcla en una solución tampón y se aplica a un gel, esas dos variables actúan
conjuntamente.

La corriente eléctrica de un electrodo repele las moléculas, al

Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Sesión nº 5

Electroforesis en Gel de Agarosa

4

tiempo que el otro electrodo las atrae. La fuerza de fricción delmaterial de gel actúa
como «tamiz molecular», separando las moléculas en función de su tamaño.
Durante la electroforesis, las macromoléculas son empujadas a través de los poros,
dependiendo su tasa de migración por el campo eléctrico de los siguientes factores:
• fuerza del campo
• tamaño y forma de las moléculas
• hidrofobicidad relativa de las muestras
• fuerza iónica y temperatura del...