Genética bacteriana



Introducción: Las bacterias son microorganismos con una capacidad extraordinaria de adaptación a diferentes condiciones ambientales. Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer sus bases genéticas , es decir, como está organizada la información genética , como realizan y regulan su expresión y mecanismo de variación genética poseen. El conocimiento del funcionamientogenético de las bacteria, sumado al hecho de que son de fácil manejo en el laboratorio y que tienen un crecimiento rápido, ha permitido usarlas para sintetizar productos útiles a la medicina. Estas posibilidades se han visto incrementadas con el desarrollo de la ingeniería genética y disponibilidad de técnicas de biología molecular. (higiene.edu.uy, 2008)
Objetivos : Conocer la variabilidadgenética bacteriana , sus mecanismos y cómo funciona la conjugación y mutación, y comprarlas , además de cómo actúan los antibióticos en estos microorganismos .
Materiales y Metodo : Para aislamiento antibióticos (Staphylococcus aureus)de mutantes resistentes .
A partir de un cultivo de Staphylococcus aureus se prepara una suspensión bacteriana adicionando 4 a 5 gotas de cultivo a 2 ml deagua estéril.
1.-Se Impregna una torula con esta suspensión y se siembra toda la superficie de una placa de agar tripticasa. Luego se coloca un sensidisco con rifampicina (5 ug) y un sensidisco con cloxacilina (5 ug) utilizando una pinza .
2.- Impregnamos otra tórula con el cultivo (cultivo concentrado) y sembramos toda la superficie de una placa de agar tripticasa que contenia 50 ug/ml derifampicina con la cepa original sin diluir.
Ambas placas se incuban a 37ºC durante 48 horas.

Para transferencia de determinantes de resistencia a los antibióticos por conjugación (cepa dadora E. coli FT17 y cepa receptora E. coli K12).
Se consta con dos cepas E. coli las cuales se adiciona 4.5 ml de cultivo E. coli K 12 y 0.5 ml de cultivo de E. coli FT 17 a un matraz que contiene 10 ml decaldo tripticasa. Se incuba durante 1 hora a 37ºC. Preparamos diluciones 10-1 y 10-2 de la mezcla bacteriana conjugante en agua destilada estéril. Sembramos, diseminando con un rastrillo hecho con la pipeta Pesteur, 0.1 ml de la dilución 10-2 en la superficie de las siguientes placas:
• Agar Mac Conkey con tetraciclina (25 ug/ml) y ácido nalidíxico (50 ug/ml)
• Agar Mac Conkey con ampicilina (10ug/ml) y ácido nalidíxico (50 ug/ml)
• Agar Mac Conkey sin antibiótio.
Además se siembra con las dos cepas en forma directa como control utilizando 3 sensidisco , cloxacilina , ampicilina y ácido nalidíxico en el agar Mac Conkey .
Incube las placas a 37ºC durante 24 horas.

En la segunda parte se entregan las siembras con las bacterias conjugadas (cepa dadora E. coli FT17 y cepa dadora E.coli K12) con evidente crecimiento bacteriano , con un haza curva se toma 4 colonias de la placa con NAL+ AMP las que introducimos a un tubo de ensayo con agua destilada, luego 4 colonias de la placa con NAL+ TET se repite el procedimiento , agitamos y luego con una tórula se siembra en una placa de agar tripticasa con tres sensidisco , cloxacilina , ampicilina y ácido nalidíxico.
En latercera parte vemos el crecimiento y hacemos el antibiograma midiendo con una regla la halo de inhibición entre el crecimiento y el sensidisco .
Resultados y discusión
Experimento de cepas mutantes
Cepa de Staphylococcus aureus diluido


Resultados del antibiograma: elsencidisco con rifampicina tiene una halo de inhibición de 40 mm y la cloxacilina tiene un halo de inhibición de 45 mm, esto implica de que la cepa no es resistente a ninguno de los dos antibióticos .
Tabla comparativa de bacterias mutantes antibiograma





Teniendo los datos de los demás podemos concluir...