Genética
Páginas: 8 (1933 palabras)
Publicado: 28 de octubre de 2013
PREGUNTAS DEL GUIÓN DE PRACTICAS DE GENÉTICA Y
BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL
SESIÓN 1
1. ¿Qué es una bacteria competente?
Es una bacteria que está apta para recibir DNA exógeno. Es un estado fisiológico especial que puede ser natural o inducido.
¿Cómo se induce la competencia en una bacteria?
Alterando la permeabilidad de la pared celular con cambios bruscos de temperatura (choquestérmicos), iones (por ejemplo de calcio),..para que estas células permitan la entrada del DNA exógeno con facilidad.
¿Qué es un plásmido?
Un fragmento extracromosómico de ácidos nucleicos (DNA o RNA) que aparece en el citoplasma de algunos procariotas. Tienen una conformación de doble hélice circular o lineal y se replican y transcriben independientes del ADN cromosómico. No se consideranportadoras de un material genético imprescindible para la célula pero le confiere ciertas ventajas como la resistencia a antibióticos.
2. Define transformación bacteriana y describe con un esquema los pasos que permiten la transformación de las bacterias con el plásmido pBl, justificando brevemente el por qué de cada uno.
Es el proceso mediante el cual un vector plasmídico es introducido ymantenido de forma estable en una bacteria competente.
En este caso, el objetivo es la introducción del plásmido pBI, que proporciona a la bacteria la resistencia a la ampicilina. Sólo las bacterias que lo incorporen serán capaces de crecer en presencia del antibiótico.
Pasos:
1º. Pipeteamos 2 µl de la solución de DNA plasmídico en el tubo de las bacterias competentes y mezclamos con cuidado(ya que las bacterias competentes son muy frágiles). Ponemos el tubo en hielo y con iones calcio durante 15 minutos para favorecer la apertura de los poros al desestructurar la pared. De esta forma facilitamos la entrada del plásmido en las células.
2º Ponemos el tubo de bacterias en un baño de agua a 42º C durante tan sólo 2 minutos para reestabilizar la membrana cerrando los poros eimpidiendo que salga el plásmido.
3º. Introducimos inmediatamente el tubo con bacterias competentes en el recipiente con hielo 5 minutos para favorecer el choque térmico y bajar la temperatura más rápidamente ya que mantenerlas más tiempo a tan alta temperatura puede ocasionar daños en la maquinaria celular.
4º. Añadimos al tubo de bacterias transformadas 900 µl de buffer TSB- glucosa a 37º C ymezclamos. Incubamos el tubo en un baño de agua a 37º C (temperatura óptima para su metabolismo) 30 minutos, para que se dupliquen las bacterias y que se mantenga el plásmido de forma estable dentro de éstas.
3. Explique por qué se utiliza medio de cultivo selectivo para crecer las bacterias después del proceso de transformación. ¿Cuál es el objetivo del inóculo de una colonia de transformadas enmedio líquido después de su crecimiento en placa?
Para determinar qué bacterias han incorporado el plásmido con el gen de resistencia a la ampicilina. Si no tienen el gen de resistencia, al entrar en contacto con este medio de cultivo que contiene el antibiótico no son capaces de dividirse al no poder producir la pared celular. (Por eso se le denomina medio selectivo).
El objetivo delinóculo de una colonia de transformadas en medio líquido después de su crecimiento en placa es la amplificación del DNA recombinante. (Obtener muchas copias del plásmido para después separarlo del DNA bacteriano).
SESIÓN 2
1. ¿Qué cepas de las utilizadas son más resistentes a la luz UV? ¿Por qué?
Las dos cepas de tipo silvestre (E. coli OV2 y E. coli MC1061) son las más resistentes a la luzUV ya que poseen los mecanismos normales de reparación de DNA de esta bacteria. Estos mecanismos son más efectivos en la cepa MC1061 que en la OV2. En cambio, las cepas mutadas (E. coli OV2 recA Tn10 y E. coli MC1061 recA Tn10) presentan una sensibilidad a UV extremadamente alta que les impide sobrevivir tras exponerlas a dosis moderadas de esta radiación. Esto es debido a la inserción de un...
BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL
SESIÓN 1
1. ¿Qué es una bacteria competente?
Es una bacteria que está apta para recibir DNA exógeno. Es un estado fisiológico especial que puede ser natural o inducido.
¿Cómo se induce la competencia en una bacteria?
Alterando la permeabilidad de la pared celular con cambios bruscos de temperatura (choquestérmicos), iones (por ejemplo de calcio),..para que estas células permitan la entrada del DNA exógeno con facilidad.
¿Qué es un plásmido?
Un fragmento extracromosómico de ácidos nucleicos (DNA o RNA) que aparece en el citoplasma de algunos procariotas. Tienen una conformación de doble hélice circular o lineal y se replican y transcriben independientes del ADN cromosómico. No se consideranportadoras de un material genético imprescindible para la célula pero le confiere ciertas ventajas como la resistencia a antibióticos.
2. Define transformación bacteriana y describe con un esquema los pasos que permiten la transformación de las bacterias con el plásmido pBl, justificando brevemente el por qué de cada uno.
Es el proceso mediante el cual un vector plasmídico es introducido ymantenido de forma estable en una bacteria competente.
En este caso, el objetivo es la introducción del plásmido pBI, que proporciona a la bacteria la resistencia a la ampicilina. Sólo las bacterias que lo incorporen serán capaces de crecer en presencia del antibiótico.
Pasos:
1º. Pipeteamos 2 µl de la solución de DNA plasmídico en el tubo de las bacterias competentes y mezclamos con cuidado(ya que las bacterias competentes son muy frágiles). Ponemos el tubo en hielo y con iones calcio durante 15 minutos para favorecer la apertura de los poros al desestructurar la pared. De esta forma facilitamos la entrada del plásmido en las células.
2º Ponemos el tubo de bacterias en un baño de agua a 42º C durante tan sólo 2 minutos para reestabilizar la membrana cerrando los poros eimpidiendo que salga el plásmido.
3º. Introducimos inmediatamente el tubo con bacterias competentes en el recipiente con hielo 5 minutos para favorecer el choque térmico y bajar la temperatura más rápidamente ya que mantenerlas más tiempo a tan alta temperatura puede ocasionar daños en la maquinaria celular.
4º. Añadimos al tubo de bacterias transformadas 900 µl de buffer TSB- glucosa a 37º C ymezclamos. Incubamos el tubo en un baño de agua a 37º C (temperatura óptima para su metabolismo) 30 minutos, para que se dupliquen las bacterias y que se mantenga el plásmido de forma estable dentro de éstas.
3. Explique por qué se utiliza medio de cultivo selectivo para crecer las bacterias después del proceso de transformación. ¿Cuál es el objetivo del inóculo de una colonia de transformadas enmedio líquido después de su crecimiento en placa?
Para determinar qué bacterias han incorporado el plásmido con el gen de resistencia a la ampicilina. Si no tienen el gen de resistencia, al entrar en contacto con este medio de cultivo que contiene el antibiótico no son capaces de dividirse al no poder producir la pared celular. (Por eso se le denomina medio selectivo).
El objetivo delinóculo de una colonia de transformadas en medio líquido después de su crecimiento en placa es la amplificación del DNA recombinante. (Obtener muchas copias del plásmido para después separarlo del DNA bacteriano).
SESIÓN 2
1. ¿Qué cepas de las utilizadas son más resistentes a la luz UV? ¿Por qué?
Las dos cepas de tipo silvestre (E. coli OV2 y E. coli MC1061) son las más resistentes a la luzUV ya que poseen los mecanismos normales de reparación de DNA de esta bacteria. Estos mecanismos son más efectivos en la cepa MC1061 que en la OV2. En cambio, las cepas mutadas (E. coli OV2 recA Tn10 y E. coli MC1061 recA Tn10) presentan una sensibilidad a UV extremadamente alta que les impide sobrevivir tras exponerlas a dosis moderadas de esta radiación. Esto es debido a la inserción de un...
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