genetica traducido

Secuencias de ADN Único se pueden determinar directamente a partir de ADN genómico de ratón. Se separa un gel de desnaturalización por mezclas de tamaño de fragmentos de ADN no marcados de restricción completa y divisiones químicas parciales de todo el genoma.
Estos carriles de ADN se transfieren y se reticula-UV para nylon membranas. La hibridación con un corto marcado con 32P monocatenariosonda produce la imagen de una secuencia de ADN "escalera" que se extiende desde el extremo 3 'o 5' de un sitio de restricción en el genoma. Numerosas secuencias diferentes pueden obtenerse a partir de una sola membrana por Reprobing. Cada banda en estas secuencias 3 representa fg de ADN complementaria a la sonda.
Los datos de secuencia de genes de cadena pesada de inmunoglobulina de ratón de sepresentan varios tipos de células. La secuenciación genómica procedimientos son aplicables al análisis de los polimorfismos genéticos, La metilación del ADN en desoxicitidina, y la proteína de ácido nucleico interacciones en la resolución de un solo nucleótido Cómo podemos visualizar el estado de los nucleótidos individuales dentro de grandes cromosomas? Durante la clonación de ADN recombinante,información sobre la metilación del ADN y la cromatina estructura se pierde. Modificación química directa del genoma combinado con completa digestión con enzimas de restricción y separación por tamaño en un gel desnaturalizante conserva algo de esto información en forma de numerosos conjuntos de migraba conjuntamente Secuencia de ADN "escaleras". Para acceder a una secuencia a la vez, los carrilesde ADN se transfieren y se reticula a un nylon
membrana y se hibridó a un corto monocatenario marcado con 32P sonda específica para un extremo del fragmento de restricción de uno dentro del genoma. Higo. La figura 1 ilustra por qué esto funciona. El sonda llamada "3" inferior "se hibridan con sólo tres clases de productos de reacción de ADN: los fragmentos apropiados que se extiende desde elextremo 3 'de la hebra inferior de la restricción fragmento, los fragmentos más largos desde el extremo 5 'de la parte superior hebra (que sólo afectará a la parte superior de la escalera secuencia escalera), y los fragmentos de medios con ambos extremos producidos por escisión química ("zigzags"). La abundancia de la adecuada fragmentos es proporcional a la probabilidad (P) de que las escinde dereacción química en cualquier diana dada. Debido la abundancia de los fragmentos intermedios es proporcional a p2, interferencia puede ser disminuida por la disminución de la extensión de la reacción. Alrededor de una escisión cada 500 nucleótidos es óptimo. La disminución de la longitud de la sonda también alivia el problema de la hibridación con fragmentos del mal fin y el medio; sondas sin embargo,muy cortos (menos de 20 nucleótidos de largo) y lavados de baja severidad pueden producir una fondo reacción cruzada. Sondas 100 a 200 nucleótidos trabajo a largo también. La metilación de ADN. Hasta 12% de todas las citosinas en vertebrados genomas están metiladas principalmente en C-G secuencias. En las plantas, hasta 50% de todas las citosinas están metiladas principalmente en CG y C-N-Gsecuencias (revisado en ref. 1). Sólo una pequeña parte estos sitios de metilación pueden ensayarse mediante análisis de restricción(2), y secuencias flanqueantes pueden afectar severamente la relación Higo. 1. Todos los productos de reacción de una sola hebra de ADN esperado en el corte de restricción completa y específica citosina parcial reacciones de escisión para un fragmento de restricción. Losresiduos de citosina se indican mediante Cs en cada una de las hebras de ADN genómico centrales. Entre estas líneas, cuatro flechas blancas cortas indican los cuatro posibles sondas de este fragmento de restricción. Las sondas se denominan por el tipo de secuencia van a producir. Por ejemplo, la hibridación con la 3 'de la sonda inferior produce la imagen de la 3' endlabeled secuencia de la cadena...