Genetica

Técnicas utilizadas en el estudio de las cromosomopatías y del cáncer. Aplicaciones clínicas. El análisis cromosómico ha proporcionado un conocimiento básico de los cambios genéticos responsables de las cromosomopatías y, en el caso del cáncer, de los procesos que suceden durante la transformación maligna de las células tumorales. En el cáncer, durante las últimas décadas, se han descrito unnúmero de alteraciones cromosómicas recurrentes y frecuentemente asociadas con subtipos tumorales particulares. Además, estas aberraciones citogenéticas han contribuido a establecer en muchos casos el pronóstico de la enfermedad y, en algunos, incluso indicar tratamientos específicos. Por todo ello, muchas decisiones terapéuticas están basadas en estos hallazgos genéticos. A los estudioscitogenéticos convencionales desarrollados en la década de los setenta, se han añadido en los últimos años otras metodologías que han permitido mejorar la sensibilidad y la especificidad de los hallazgos citogenéticos. Estas técnicas son derivadas de la hibridación “in situ” fluorescente (HISF). Las más usadas han sido la hibridación genómica comparada (HGC) y la HISF multicolor (HISF-M) o SKY, que junto conla PCR, han supuesto una auténtica revolución tanto en el diagnóstico citogenético de las cromosomopatías como de los tumores en general (Tabla 1). 1. Citogenética Convencional

En la actualidad, el análisis de los cromosomas es obligatorio en el estudio de la sangre en el caso de las alteraciones genéticas constitucionales y de la médula ósea o tumores en los procesos oncológicos. La muestraque se cultiva en los estudios citogenéticos puede proceder de cualquier tejido: sangre, médula ósea, líquido amniótico, ganglio, bazo, masas tumorales o efusiones tumorales. Las condiciones de cultivo varían en relación con el tipo de tejido que se pretende analizar y con el diagnóstico de sospecha de la enfermedad. Una vez cultivada, se procede a la recolección de los cromosomas y posteriormenteestos se tiñen adoptando el patrón característico de bandeo cromosómico. Finalmente, las metafases son analizadas mediante un sistema de captura y procesamiento de imágenes (Figura 1).

2.

Hibridación “In Situ” Fluorescente

La hibridación “in situ” fluorescente (HISF) consiste en la detección de secuencias de ADN (sondas) previamente marcadas con fluorescencia sobre cromosomas o núcleoscelulares fijados sobre un portaobjetos, usando para ello un microscopio de fluorescencia. A diferencia de la citogenética convencional, la mayoría de las técnicas de HISF no precisan de células tumorales en división, por lo que es de gran ayuda en el estudio de muestras en las que no se han obtenido metafases. Además puede aplicarse directamente sobre células extendidas de sangre periférica omédula ósea, improntas de tejido en fresco o congelado, y tejido seccionado y parafinado. Tras la hibridación en núcleos en interfase o en metafase es posible observar la presencia de alteraciones cromosómicas numéricas o estructurales. Esta metodología se usa cada vez más en el diagnóstico de las hemopatías que tienen una alteración característica, y también es de extraordinaria importancia en elestudio de las alteraciones cromosómicas en el líquido amniótico y en la sangre

de los enfermos en los que se sospecha la existencia de una alteración cromosómica y en los que no se han podido obtener metafases. 2.1. Sondas utilizadas en la HISF

En la actualidad, se dispone de un gran número de sondas para el estudio de las alteraciones genéticas frecuentes en las cromosomopatías, enenfermedades genéticas que se asocian con microdeleciones y en las neoplasias. Estas sondas están marcadas directamente con fluorocromos, lo que facilita su uso y permite una detección rápida y eficaz de las alteraciones numéricas y de las ganancias, pérdidas o reordenamientos de genes tanto en metafase como en interfase celular. Las sondas utilizadas en la HISF se pueden clasificar en: - Sondas...