Genetica

ADN RECOMBINANTE

LA TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE , ES UN CONJUNTO DE METODOS UTILIZADOS PARA LOCALIZAR AISLAR ALTERAR ESTUDIAR Y REMBINAR SECUENCIAS DE ADN .SE UTILIZA PARA CREAR PRODUCTOS COMERCIALES Y DIAGNOSTICAR Y TRATAR ENFERMEDADES .

LA TECNOLOGIA DE ADN RECOMBINANTE REQUIERE METODOS ESPECAILES PORQUE LOS GENES INDIVIDUALES CONSTITUYEN UNA FRACCION MINUSCUULA DEL ADN Y NO PUEDENOBSRVARSE.
■ Se inició con la inserción de un trozo de ADN de un plásmido en otro(molecula híbrida nueva es ADN recombinante: QUIMERA
■ “Combinar ADN de 2 fuentes distintas”
■ Este ADN a su vez puede insertarse en otro organismo vivo para su transcripción y traducción.

TECNICAS DE ADN RECOMBINANTE

SE UTILIZAN PARA CREAR MOLECULAS DE ADN RECOMBINANTE

ENZIMAS DE RESTRICCIONSon producidas naturalmente por bacterias como defensa frente a virus. La bacteria se protege de su acción modificando la secuencia de reconocimiento por agregado de grupos metilo a su ADN (metilación)
Existen 3 tipos
■ I: reconocen una secuencia específica pero corta el ADN en sitios al azar que pueden estar a 1000 o mas pb de la secuencia de reconocimiento
■ II: reconocen secuenciaespecífica y corta en ella
■ III: reconocen secuencia especifica pero corta el ADN en sitios cercanos ubicados a 25pb del reconocimiento
Las secuencias reconocidas son de 4 a 8 pb y son palíndromos ( se leen igual hacia delante o hacia atrás Ej MENEM

VISUALIZACION DE LOS FRAGMENTOS DE ADN

DESPUES DE COMLETAR UNA REACCION DE DE RESTRICCION SURGEN CIERTOS INTERROGANTES .¿ LA ENZIMA DERESTRICCION CORTO EL ADN ¿ CUANTAS VECES S CORTO EL ADN ¿ CUALES SON LOS TAMAÑOS DE LOS FRAGMENTO RESUTANTES ¿
LA ELECTROFORESIS ( TECNICA BIOQUIMICA) EN GEL NOS PROPORCIONA UN MEDIO PARA RESPONDER ESTAS PREGUNTAS

■ SEPARACION DE MOLECULAS SOBRE LA BASE DE SU TAMAÑO Y CARGA ELECTRICA
■ Separa fragmentos de ADN en función de su tamaño al aplicar una corriente eléctrica a un gel. Laagarosa es un polisacarido aislado de algas marinas. AGAROSA + BUFFER ( GEL POROSO
■ El ADN al tener grupos fosfatos unidos a cada nucleótido éste está cargado negativamente ( migra del POLO − al POLO ( distribuyéndose a lo largo del gel de acuerdo a su tamaño
■ ( FRAGMENTOS MÁS PEQUEÑOS SE MUEVEN MÁS RÁPIDO QUE LOS MÁS GRANDES.
■ Visualización: se tiñe el gel con colorantes capacesde intercalarse entre las bases del ADN de modo tal que se visualice solo eso: Bromuro de etidio(visible al UV)

ES DECIR LOS FRAGMENTOS DE ADN PUEDEN SEPRARSE Y SUS TAMAÑOS DETERMINARSE MEDIANTE EL EMPLEO DE ELECTROFORESIS EN GEL Y LOS FRAGMENTOS PUEDEN OBSERVARSE POR EL USO DE UN COLORANT Q ES ESPECIFICO

LOCALIZACION DE LOS FRAGMENTOS DE ADN CON SOUTHER BLOTS Y SONDAS

¿ COMOS LOCALIZAN LOS FRAGMENTOS DESEADOS EN UNA DOTACION TAN GRANDE E ADN?

SE UTILIZA UNA ZONDA , ES DECIR UNA MOLECULA CON UNA SCUENCIAS DE BASES COMPLEMENTARIAS PARA UNA SECUENCIA DEL GEN EN INTERES , ES DECIR LA ZONDA PUEDE UTILIZARCE PARA ENCONTRAR UN GEN ESPECIFICO
Los fragmentos de restricción pueden ser separados por electroforesis en un gel
de agarosa sobre la base de sus tamaños.Ello posibilita la localización específica de
uno de los fragmentos, para lo cual se comienza tratando al gel con una solución
alcalina que desnaturalice las moléculas de ADN, es decir, separe sus dos cadenas. Con
el objeto de facilitar la manipulación de las bandas electroforéticas (invisibles para el
investigador), éstas son transferidas a un filtro de nitrocelulosa. Para ello el gel se
colocasobre varias hojas de papel empapadas con solución fisiológica, se aplica el filtro
de nitrocelulosa sobre el gel. Y sobre el filtro se ponen varias hojas secas de papel
absorbente. Dado que la solución salina asciende por capilaridad desde las hojas
empapadas hacia las secas, arrastra a los fragmentos de ADN contenidos en las bandas
del gel, las cuales son transferidas al filtro de...