Genotipaje De Ratones Transgenicos
Páginas: 4 (991 palabras)
Publicado: 9 de diciembre de 2012
GENOTIPAJE DE RATONES TRANSGÉNICOS
GDNF es un potente factor neurotrófico implicado en la supervivencia y protección de neuronas dopaminérgicas, catecolaminérgicas y adrenérgicas. Aunque su rol encerebro adulto no se conoce totalmente, resulta prometedora una posible terapia con GDNF para el tratamiento de desórdenes neurodegenrativos como el Parkinson y la enfermedad de Alzheimer.
Se handesarrollado diversos modelos para el estudio del papel que posee GDNF en las distintas alteraciones neuronales.
Uno de ellos es un ratón knock out condicional para GDNF. Es necesario que sea unknock out condicional para eliminar la expresión de GDNF cuando el ratón es adulto, pues si es knock out no logra sobrevivir al estado embrionario. Lo que se hace es sustituir un alelo de GDNF por ungen GDNF con sitios LoxP a los lados, mediante recombinación homóloga.
El ratónGDNF F/+ debe ser cruzado con otro que posea el transgén Esr-1 Cre, de modo que la progenie resulte knock out induciblecuando se dé la expresión de Cre recombinasa. (Pasdcual y col; 2008)
Dado que el ratón posee dos alelos que codifican para GDNF, es necesario inhabilitar al que no esta flanqueado por sitios LoxP.Para ello se crea un ratón deficiente en GDNF, mediante recombinación homóloga para eliminar exones codificantes. Lo que se hace es sustituir el primer exón de GDNF por LacZ, para así obtener elratón GDNF LacZ/+
Este tipo de modelos permiten estudiar la función de distintos genes.
OBJETIVOS
Mediante amplificación por PCR, será posible genotipar varios ratones, a fin de comprobar si setrata del wt o del ratón que posee el alelo mutado. Realizaremos PCR para tres genes:
GDNF, LacZ y Cre Bf-1
MATERIAL Y MÉTODOS
Se evalúan ratones nacidos el 29 de Abril de 2012, como consecuenciade haber cruzado
CBF1(+/-) GDNF (Flox/+) [MACHO] X GDNF (Flox/+) (LacZ/+) [HEMBRA]
Aislamiento del DNA
El DNA se toma de las colas de los ratones. Para ello se cortan pequeños trozos...
GDNF es un potente factor neurotrófico implicado en la supervivencia y protección de neuronas dopaminérgicas, catecolaminérgicas y adrenérgicas. Aunque su rol encerebro adulto no se conoce totalmente, resulta prometedora una posible terapia con GDNF para el tratamiento de desórdenes neurodegenrativos como el Parkinson y la enfermedad de Alzheimer.
Se handesarrollado diversos modelos para el estudio del papel que posee GDNF en las distintas alteraciones neuronales.
Uno de ellos es un ratón knock out condicional para GDNF. Es necesario que sea unknock out condicional para eliminar la expresión de GDNF cuando el ratón es adulto, pues si es knock out no logra sobrevivir al estado embrionario. Lo que se hace es sustituir un alelo de GDNF por ungen GDNF con sitios LoxP a los lados, mediante recombinación homóloga.
El ratónGDNF F/+ debe ser cruzado con otro que posea el transgén Esr-1 Cre, de modo que la progenie resulte knock out induciblecuando se dé la expresión de Cre recombinasa. (Pasdcual y col; 2008)
Dado que el ratón posee dos alelos que codifican para GDNF, es necesario inhabilitar al que no esta flanqueado por sitios LoxP.Para ello se crea un ratón deficiente en GDNF, mediante recombinación homóloga para eliminar exones codificantes. Lo que se hace es sustituir el primer exón de GDNF por LacZ, para así obtener elratón GDNF LacZ/+
Este tipo de modelos permiten estudiar la función de distintos genes.
OBJETIVOS
Mediante amplificación por PCR, será posible genotipar varios ratones, a fin de comprobar si setrata del wt o del ratón que posee el alelo mutado. Realizaremos PCR para tres genes:
GDNF, LacZ y Cre Bf-1
MATERIAL Y MÉTODOS
Se evalúan ratones nacidos el 29 de Abril de 2012, como consecuenciade haber cruzado
CBF1(+/-) GDNF (Flox/+) [MACHO] X GDNF (Flox/+) (LacZ/+) [HEMBRA]
Aislamiento del DNA
El DNA se toma de las colas de los ratones. Para ello se cortan pequeños trozos...
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