Geografia

Prueba

Composición

Indicadores

Reactivos de lectura

Fundamento La membrana de las bacterias contiene péptidoglicano. Cuando se adiciona el cristal violeta y lugol forman un complejo cristal violeta-yodo. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezclade alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta-yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a laacción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea. Se basa en la producción bacteriana de una enzima oxidasa intracelular, esta reacción de oxidasa se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidación del citocromo reducido por el oxigenomolecular que a su vez, actúa como un receptor de electrones en la parte terminal del sistema de transferencia de electrones. Reacción química: Los colorantes de p-fenilendiamina son aminas aromáticas primarias derivados, diamino del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo fenilendiamina pero oxida al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la fenilendiamina esmetilada y cuantos mas grupos metilados se introducen en el radical amino el color es mas azul. Si se introducen tres grupos fenilos en lugar del metilo el color es aun más oscuro. La catalasa actua como una enzima esencial de defensa biológica contra la toxisidad del oxigeno. La catalasa es una enzima que descompone al peróxido

Interpretación

Tinción de Gram

Agua esteril Cristal violetaLugol Alcohol-acetona Safranina

Gram positivas: Moradas a azules Gram negativas: Rojas a rosas

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Oxidasa

Discos con N,N,N,N-tetrametil -p-fenilendiamina

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Positivo: coloración azul marino Negativo: sin cambio de coloración

Catalasa

Peróxido de hidrogeno 30%-----------------------

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Positivo: efervescencia burbujeo Negativo: sin cambios

O/F (oxidacion/fer mentacion)

Medio básico de Hugh Leifson Peptona NaCl Fosfato de potasio Hidratos de carbono Agar Agua destilada

Azul de bromotimol Ph: verde a 7,0 amarillo a 6,0 azul a 7,6

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Gota suspendida

Agua esteril

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de hidrógeno en oxígeno y agua Se basa en la determinación del metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono. Son necesarios dos tubos del medio para la prueba. El medio du un tipo se expone al aire y el otro se cubre con aceite mineral o parafina líquido. Las bacterias oxidativas producen acido solo en el tubo abierto expuesto al oxigeno atmosférico; losmicroorganismos fermentadores producen ácidos en ambos tubos; as bacterias no sacaroliticas son inertes en este medio y permanecen con un pH alcalino. Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posiciones variadas. La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. En este mediose observa si la bacteria es capaz de fermentar glucosa y lactosa, si es así los carbohidratos forman ácidos que hacen que vire el indicador del medio, además si tiene producción de acido sulfúrico; el tiosulfato es un intermediario que reduce el sulfuro a H2S en el metabolismo de la bacteria, el tiosulfato remplaza al sulfato como fuente de azufre. El H 2S reacciona con el citrato de amonio...