Glucosa oxidasa (practica)

DETERMINACION DE GLUCOSA
Practica no. 1

Introducción
La reacción de la glucosa oxidasa junto con una reacción auxiliar se ha utilizado ampliamente para la determinación de la glucosaen los fluidos biológicos.
Se han desarrollado multitud de reacciones auxiliares distintas a fin de mejorar la especificidad global del sistema de reacción o para retener laespecificidadinherente de la glucosa oxidasa.
El método utilizado en este reactivo se basa en la reacción indicadora de peróxido de hidrógeno que une 4-aminoantipirina a un compuesto fenólico, como propusoinicialmente Trinder.
Glucosa oxidasa
1. Glucosa + O2 + H2O ——————————> Ácido glucónico + H2O2
Peroxidasa
2. H2O2 +HBA + 4-AAP ————————> Tinte de quinonimina + H2O
1. La glucosa se oxida por acción de la glucosa oxidasa para dar ácido glucónico y peróxido de hidrógeno.
2. El peróxido de hidrógenoreacciona en presencia de peroxidasa con HBA y con 4-aminoantipiridina (4-AAP) para dar lugar a un tinte de quinonimina rojo.
3. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración deglucosa y se puede medir fotométricamente entre 460 y 560 nm.
HBA = Ácido 4-hidroxibenzoico
4-AAP = 4-Aminoantipirina

Objetivo
Que el alumno determine las concentraciones de glucosa ensuero en condiciones de ayuno y postprandial con el método de la glucosa oxidasa, para explicar los resultados obtenidos con los valores normales de referencia de la técnica para poder sugerir unaposibilidad diagnostica.

Material
* 4 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
* 1 Pipeta automática de 1.0 ml y de 10 ul
* 1 Reloj o cronómetro
* 2 jeringas de 5 ml. desechables
* Puntaspara pipeta de 1.0 ml desechables
* Calibrador de glucosa 100 mg/dL
* Incubador
* Espectrofotómetro

Desarrollo / Procedimiento
1. Realización de Venopuncion al paciente para...