Glucosa

GLUCOSA
Fundamento
La glucosa se determina después de la oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona bajo la catálisis de peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona formando un complejo rojo-violeta usando la quinoneimina como indicador.
Principio de la reacción
Glucosa + O2 + H2O GOD ácido glucónico + H2O2
2 H2O2 + 4-aminofenazona +fenol POD quinoneimina + 4 H2O2
Muestras
Plasma,suero.
La glucosa es estanle por 24 horas de 2-8°C, si el suero oplasma es separado dentro de 30 minuots después de la toma de la muestra de sangre.

Método
Macro | Micro |
Pipetear en las cubetas | STD o muestra | Blanco de reactivo | STD o muestra | Blanco de reactivo |
STD o muestra | 20 µl | ------| 10 µl | ------ |
RGT | 2000 µl | 2000 µl | 1000 µl | 1000 µl |
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25°C ó 5 minutos a 37°C. Medir la absorbancia del STD y las muestrasfrentea un blanco de reactivo antes de 60 minutos (∆A). |

Calculo de la concentración de la glucosa
c= 100* ∆A muestra (mg/ml)
∆A STD

c= 5.55* ∆A muestra (mmol/l)∆A STD

Valores normales
Suero, plasma (en ayunas): 75-115 mg/ml ó 4.2-6.2 mmol/l.




UREA
Fundamento
La urea se hidroliza por acción de laureasa en presencia de agua para producir amoniaco y dióxido de carbono. En una reacción de Berthelot modificada, los iones de amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato para formar un complejo verde. El aumentode la absorbancia a 578 nm esproporcional a la concentración de urea en muestra.

Muestras
Suero, plasma (todos los anticoagulantes menos el heparinato de amonio pueden ser usados) y orina. Diluirla orina 1+100 con agua destilada.
No usar sueros lipémicos.
Suero oplasma se pueden almacenar hasta tres días a +4°C. Para un almacenamiento prolongado, congelar menos 20°C.Pipetear en cubetas | Blanco de reactivo | Muestra o STD |
Muestra/ STD | ---- | 10 µl |
Reactivo enzimático 1a | 1000 µl | 1000 µl |
Mezclar, incubar por 5 min.a 20-25°C o por 3 minutos a 37°C. |
RGT2 | 1000 µl | 1000 µl |
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25°C o por 5 min. A37°C. Leer la absorbanciade la muestra (A muestra) y del patrón (A STD) frente a un blancode reactivo antes de 60 minutos. |

Calcular la concentración de urea y BUN

C= A muestra * factor
A STD

Factor de conversión de BUN, urea
C (BUN)= 0.466* C (urea)
C (urea)= 2.14* C (BUN)

Valores de referencia
Suero (urea): 10-50 mg/dl ó 66.6 mmol/l (urea)
Orina (urea): 20-35 mg/24 h ó 6660 mmol/l (urea)

CREATININA

Fundamento
La creatinina en soluciónalcalina forma un complejo coloreado rojo-naranja con ácido pícrico. La absorbancia de este complejo es directamente proporcional a la concentración decreatinina en la muestra.

Muestra
Suero, plasma heparinizado u orina.
Evitar la hemólisis
Estabilidad: 24 horas de 2-8°C.
Diluya la orina 1+49 conagua destilada.

Método
Pipetee en las cubetas | Semi-micro | Macro |
Muestra/STD | 100 µl | 200µl |
Reactivo de trabajo | 1000 µl | 2000 µl |
Mezcle e inicie el cronómetro. Después de 30 segundos lea laabsorbancia A1. Lea la absorbancia A2 exactamente 2 minutos después. A2-A1= ∆A muestra ó ∆A STD |

Cálculo
1.- Suero o plasma
C= 2.0 * ∆A muestra mg/dl
∆A STD
C= 176.8 * ∆A muestra µmol/l
∆A STD
2.- Orina
C= 100 * ∆A muestra mg/dl∆A STD

Valores de referencia
Suero | mg/dl | µmol/l |
Hombres | 0.6- 1.1 | 53-97 |
Mujeres | 0.5- 0.9 | 44-80 |
Orina | 1000- 1500 mg/ 24 horas | |

COLESTEROL

Fundamento
El colesterol se determina después de la hidrólisis enzimática y la oxidación. El indicador es la quinoneimina formada por el peróxido de hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y...