Glucosa
Páginas: 21 (5232 palabras)
Publicado: 7 de abril de 2014
Glucosa Oxidasa
Determinacion de glucosa y producción
Determinación de glucosa en alimentos.
Aunque la glucosa puede determinarse por métodos químicos, estos en su mayoría carecen de especificidad y no pueden distinguir la glucosa de otros monosacáridos. Tanto en análisis clínicos como en la industria alimentaria se utilizanmétodos enzimáticos para la determinación de glucosa. Así la glucosa oxidasa es una flavoproteina altamente específica que cataliza la oxidación de la glucosa a β -D-gluconolactona, sin que ningún otro azúcar natural reaccione en extensión apreciable.
Esta reacción en la que se consume oxígeno podría seguirse manométricamente o mediante un electrodo de oxígeno. Sin embargo, para poder seguirel curso de esta reacción espectrofotométricamente es necesario acoplar a la misma una segunda reacción enzimática indicadora adecuada. Para la determinación colorimétrica de glucosa por el método de la oxidasa, se añade al medio peroxidasa de rábano silvestre (HRP), que elimina el peróxido de hidrógeno a medida que se forma, a la vez que se genera un colorante adecuado según el siguiente esquemade reacción:
Se podrían utilizar como aceptores de oxígeno benzidina,o-toluidina, o-dianisidina. Sin embargo, la naturaleza carcinogénica de estos compuestos ha impulsado la búsqueda de aceptores alternativos. Uno de estos sistemas es la 4-aminoantipirina que reacciona con el fenol y el peróxido de hidrógeno en presencia de HRP para formar un colorante con
estructura de quinonaimina, quepresenta un máximo de absorción a 505 nm.
La cantidad de colorante generada, y por tanto la absorbancia medida a 505 nm, será directamente proporcional a la cantidad de glucosa.
El disacárido sacarosa puede también determinarse específicamente basándose en el esquema de reacciones anterior, previa hidrólisis enzimática del mismo con la enzima fructofuranosidasa o invertasa.Este enzima cataliza la transformación de la sacarosa en una molécula de fructosa y una molécula de glucosa (azúcar invertido). Se debe determinar la glucosa en la muestra antes y después de la hidrólisis enzimática, por diferencia se obtiene el contenido de sacarosa.
Método enzimático para la determinación de glucosa en sangre
(glucemia)
La determinación de la glucosa es elmétodo por el cual se cuantifican los niveles de glucosa en plasma. Esto permite realizar el diagnóstico de diferentes estados metabólicos (hipoglucemia, normoglucemia o hiperglucemia)
Teniendo en cuenta que los valores normales de glucosa en sangre son 70 a 110 mg%, pero en casos patológicos pueden ser: menores de 70 mg% o sobrepasar largamente el valor de 110 mg%, se debe utilizar un métodobioquímico que permita detectar niveles de glucosa en un amplio rango de concentraciones. El método de elección es el de la glucosa oxidasa-peroxidasa.
Fundamento del método enzimático de la glucosa oxidasa peroxidasa.
La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD) a ácido glucónico y agua oxigenada (H2O2). El agua oxigenada en presencia de la enzima peroxidasa (POD)produce el acoplamiento oxidativo del fenol con la 4-aminofenazona dando lugar a la formación de un cromógeno 4-p-benzoquinona-monoimino fenazona, de color rojo-cereza. La cuantificación del producto coloreado se realiza midiendo la absorbancia a 505 nm (A505 nm) en un espectrofotómetro o en su defecto un fotocolorímetro, utilizando filtro verde de A490-530 nm.
Cada molécula de glucosa que reaccionaproduce una molécula de H2O2 y cada una de éstas oxida una molécula de colorante, produciendo una molécula coloreada (rojo cereza). El desarrollo del color es cuantificado en un fotocolorímetro. Este valor debe ser comparado con los obtenidos a partir de cantidades conocidas de glucosa, con los que se construye una curva de calibración: a mayor cantidad de glucosa, mayor será la cantidad de...
Determinacion de glucosa y producción
Determinación de glucosa en alimentos.
Aunque la glucosa puede determinarse por métodos químicos, estos en su mayoría carecen de especificidad y no pueden distinguir la glucosa de otros monosacáridos. Tanto en análisis clínicos como en la industria alimentaria se utilizanmétodos enzimáticos para la determinación de glucosa. Así la glucosa oxidasa es una flavoproteina altamente específica que cataliza la oxidación de la glucosa a β -D-gluconolactona, sin que ningún otro azúcar natural reaccione en extensión apreciable.
Esta reacción en la que se consume oxígeno podría seguirse manométricamente o mediante un electrodo de oxígeno. Sin embargo, para poder seguirel curso de esta reacción espectrofotométricamente es necesario acoplar a la misma una segunda reacción enzimática indicadora adecuada. Para la determinación colorimétrica de glucosa por el método de la oxidasa, se añade al medio peroxidasa de rábano silvestre (HRP), que elimina el peróxido de hidrógeno a medida que se forma, a la vez que se genera un colorante adecuado según el siguiente esquemade reacción:
Se podrían utilizar como aceptores de oxígeno benzidina,o-toluidina, o-dianisidina. Sin embargo, la naturaleza carcinogénica de estos compuestos ha impulsado la búsqueda de aceptores alternativos. Uno de estos sistemas es la 4-aminoantipirina que reacciona con el fenol y el peróxido de hidrógeno en presencia de HRP para formar un colorante con
estructura de quinonaimina, quepresenta un máximo de absorción a 505 nm.
La cantidad de colorante generada, y por tanto la absorbancia medida a 505 nm, será directamente proporcional a la cantidad de glucosa.
El disacárido sacarosa puede también determinarse específicamente basándose en el esquema de reacciones anterior, previa hidrólisis enzimática del mismo con la enzima fructofuranosidasa o invertasa.Este enzima cataliza la transformación de la sacarosa en una molécula de fructosa y una molécula de glucosa (azúcar invertido). Se debe determinar la glucosa en la muestra antes y después de la hidrólisis enzimática, por diferencia se obtiene el contenido de sacarosa.
Método enzimático para la determinación de glucosa en sangre
(glucemia)
La determinación de la glucosa es elmétodo por el cual se cuantifican los niveles de glucosa en plasma. Esto permite realizar el diagnóstico de diferentes estados metabólicos (hipoglucemia, normoglucemia o hiperglucemia)
Teniendo en cuenta que los valores normales de glucosa en sangre son 70 a 110 mg%, pero en casos patológicos pueden ser: menores de 70 mg% o sobrepasar largamente el valor de 110 mg%, se debe utilizar un métodobioquímico que permita detectar niveles de glucosa en un amplio rango de concentraciones. El método de elección es el de la glucosa oxidasa-peroxidasa.
Fundamento del método enzimático de la glucosa oxidasa peroxidasa.
La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD) a ácido glucónico y agua oxigenada (H2O2). El agua oxigenada en presencia de la enzima peroxidasa (POD)produce el acoplamiento oxidativo del fenol con la 4-aminofenazona dando lugar a la formación de un cromógeno 4-p-benzoquinona-monoimino fenazona, de color rojo-cereza. La cuantificación del producto coloreado se realiza midiendo la absorbancia a 505 nm (A505 nm) en un espectrofotómetro o en su defecto un fotocolorímetro, utilizando filtro verde de A490-530 nm.
Cada molécula de glucosa que reaccionaproduce una molécula de H2O2 y cada una de éstas oxida una molécula de colorante, produciendo una molécula coloreada (rojo cereza). El desarrollo del color es cuantificado en un fotocolorímetro. Este valor debe ser comparado con los obtenidos a partir de cantidades conocidas de glucosa, con los que se construye una curva de calibración: a mayor cantidad de glucosa, mayor será la cantidad de...
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