GLUCOSURIA DE 24 HORA

GLUCOSURIA DE 24 HORA
Método de glucosa oxidasa.
FASE PREANALITICA.
INTRODUCCION.
La glucosa es un monosacárido que no debe estar presente las muestras orina, esto ocurre cuando se traspasa suumbral renal y es frecuente en los pacientes diabéticos o con trastornos en el metabolismo de los carbohidratos.
Objetivo: Cuantificar la presencia de glucosa en las muestras de orina de 24h.
Fundamento:Se basa en la determinación de glucosa mediante un método enzimático colorimétrico donde enzima glucosa oxidasa desdobla la glucosa a peróxido de hidrógeno y este reacciona con un cromógeno produciendocolor, el cual es medido espectrofotométricamente.
Reactivo necesario:
Rapiglucotest (Kit de reactivo para la determinación de glucosa en fluidos biológicos).
Reactivo de Benedict.
Aparatos,utensilios y medios de medición
Tubos plásticos de 10 ml graduados de centrífuga.
Tubo para ensayo de 13 x 100 ó 15 x 125 mm.
Gradilla para los tubos de ensayos.
Pipetas graduadas de 10 ml.
Probeta graduadade 2000 ml.
Pipeta automática de 20(L.
Pipeta automática de 1000(L.
Foto colorímetro o espectrofotómetro para leer a una longitud de onda entre 500 y 550 nm (preferiblemente de 505 nm).
Cubeta de 1 mlde volumen y 1 cm de paso de luz.
Muestra: Orina de 24h debidamente almacenada y preservada.
FASE ANALITICA.
MARCHA ANALÍTICA.
1. Medir volumen en litros de la orina homogenizada previamente.2. Centrifugar 10 ml de orina por 5 min a 1500rpm.
3. Realizar prueba de Benedict a la orina centrifugada para determinar la presencia de azúcares en la orina de la forma siguiente:
a. Añadir a un tubo deensayo 2.5 ml de reactivo de Benedict.
b. Añadir 4 gotas de orina
c. Colocar el tubo con la mezcla anterior en baño de ebullición hasta 2 min.
d. Si la orina no contiene ó contiene cantidadesinsignificantes de glucosa permanece el Benedict azul o aparece una coloración verde azul respectivamente.
e. Si hay permanencia de glucosa toma coloración amarrilla naranja o ladrillo en orden creciente....