GLUCÓLISIS
Páginas: 6 (1320 palabras)
Publicado: 6 de diciembre de 2015
DETERMINACIÓN DE LOS PRODUCTOS DE GLUCÓLISIS
OBJETIVO: Determinar algunos de los productos formados en la fermentación de la glucosa y de una muestra biológica por acción de la levadura y del lactobacillus.
FUNDAMENTO:
La glucosa por acción de la levadura de saponificación saccharomyces cerevisiae es capaz de degradarse en condiciones anaeróbicas hasta etanol, en el procesoconocido como fermentación alcohólica. La misma glucosa, por acción de Lactobacillus del yogurt, se transforma en ácido láctico, proceso conocido como fermentación láctica. En ambos casos hay una serie de reacciones comunes a ambos procesos, que van desde la glucosa hasta el ácido pirúvico. Identificando la presencia de ácido pirúvico, acetaldehído y etanol se comprueba que se está realizando unafermentación alcohólica. De Forma similar, al identificar la presencia de ácido láctico y ácido pirúvico se puede comprobar que se está llevando a cabo una fermentación láctica
Glucosa
Fermentación Alcohólica Fermentación Láctica
Etanol Acetaldehído
Ácido Pirúvico Ácido Láctico
El ácidopirúvico, por ser un metabolito intermediario se va a encontrar en muy baja concentración. Igual cosa sucede con el acetaldehído, un metabolito intermediario en la fermentación alcohólica. Para lograr detectarlos es necesario impedir que se transformen en otros compuestos, lo cual se puede lograr bloqueando, mediante inhibidores, las enzimas que catalizan la conversión de éstos compuestos.También se pueden cambiar las condiciones fisiológicas para que la enzima funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad máxima o, por último, se puede usar un agente que atrape el intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse, como los de ésta práctica.
La enzima piruvato descarboxilasa (2-oxoácido carboxi-liasa, 4.1.1.1 ), que cataliza la conversiónde ácido pirúvico en acetaldehído, no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reacción con nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrazina.
Para “atrapar” el acetaldehído se añade a la mezcla sulfito de sodio. La presencia de acetaldehído se puede demostrar por el color azul producido por la reacción connitroprusiato de sodio y piperidina. Al demostrar la presencia de acetaldehído, que es un intermediario de la fermentación alcohólica, se puede comprobar la realización de éste proceso.
En forma similar, al detectar la presencia de ácido láctico se puede comprobar que ocurrió fermentación láctica.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayoCinta de enmascarar Baño María Termómetro de 0- 100ºC Embudos de vidrio Papel de filtro
Pipeta Pasteur Solución de glucosa al10% Levadura de cerveza al 10% en agua Yogurt o leche
Suspensión de levadura al 10% en Na2HPO4 0.2M Sulfato de amonio sólido
Muestra de Carbohidratos (jugo de fruta, o zumo de papa )
Solución de ácido tricloroacético al 10% Nitroprusiato de sodio al 5% Solución de 2,4dinitrofenilhidrazina al 0.2% en HCl 2M Amoniaco concentrado Hidróxido de sodio al 10% Piperidina al 3%
Carbonato sódico finamente pulverizado Ácido pirúvico al 2% Ácido láctico al 2% Acetaldehído al 5 % Eter etílico...
DETERMINACIÓN DE LOS PRODUCTOS DE GLUCÓLISIS
OBJETIVO: Determinar algunos de los productos formados en la fermentación de la glucosa y de una muestra biológica por acción de la levadura y del lactobacillus.
FUNDAMENTO:
La glucosa por acción de la levadura de saponificación saccharomyces cerevisiae es capaz de degradarse en condiciones anaeróbicas hasta etanol, en el procesoconocido como fermentación alcohólica. La misma glucosa, por acción de Lactobacillus del yogurt, se transforma en ácido láctico, proceso conocido como fermentación láctica. En ambos casos hay una serie de reacciones comunes a ambos procesos, que van desde la glucosa hasta el ácido pirúvico. Identificando la presencia de ácido pirúvico, acetaldehído y etanol se comprueba que se está realizando unafermentación alcohólica. De Forma similar, al identificar la presencia de ácido láctico y ácido pirúvico se puede comprobar que se está llevando a cabo una fermentación láctica
Glucosa
Fermentación Alcohólica Fermentación Láctica
Etanol Acetaldehído
Ácido Pirúvico Ácido Láctico
El ácidopirúvico, por ser un metabolito intermediario se va a encontrar en muy baja concentración. Igual cosa sucede con el acetaldehído, un metabolito intermediario en la fermentación alcohólica. Para lograr detectarlos es necesario impedir que se transformen en otros compuestos, lo cual se puede lograr bloqueando, mediante inhibidores, las enzimas que catalizan la conversión de éstos compuestos.También se pueden cambiar las condiciones fisiológicas para que la enzima funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad máxima o, por último, se puede usar un agente que atrape el intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse, como los de ésta práctica.
La enzima piruvato descarboxilasa (2-oxoácido carboxi-liasa, 4.1.1.1 ), que cataliza la conversiónde ácido pirúvico en acetaldehído, no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reacción con nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrazina.
Para “atrapar” el acetaldehído se añade a la mezcla sulfito de sodio. La presencia de acetaldehído se puede demostrar por el color azul producido por la reacción connitroprusiato de sodio y piperidina. Al demostrar la presencia de acetaldehído, que es un intermediario de la fermentación alcohólica, se puede comprobar la realización de éste proceso.
En forma similar, al detectar la presencia de ácido láctico se puede comprobar que ocurrió fermentación láctica.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayoCinta de enmascarar Baño María Termómetro de 0- 100ºC Embudos de vidrio Papel de filtro
Pipeta Pasteur Solución de glucosa al10% Levadura de cerveza al 10% en agua Yogurt o leche
Suspensión de levadura al 10% en Na2HPO4 0.2M Sulfato de amonio sólido
Muestra de Carbohidratos (jugo de fruta, o zumo de papa )
Solución de ácido tricloroacético al 10% Nitroprusiato de sodio al 5% Solución de 2,4dinitrofenilhidrazina al 0.2% en HCl 2M Amoniaco concentrado Hidróxido de sodio al 10% Piperidina al 3%
Carbonato sódico finamente pulverizado Ácido pirúvico al 2% Ácido láctico al 2% Acetaldehído al 5 % Eter etílico...
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