gpos vulnerables

Experimento 3
Obtención de la fracción mitocondrial del hígado de raton.
Procedimiento
Al ratón recién sacrificado se le extrae el hígado y se mantiene en hielo.
Se homogeniza usando 5ml deKCl luego se añaden 5ml mas de KCl
Y se pone en la centrifuga a 500 rpm por 15 minutos
Se separa el sobrenadante y se centriguga nuevamente a 3000rpm por 15 min
Se separa este segundo sobrenadante yse conserva en frio etiquetándolo con el nombre de sobrenadante de hígado
Al residuo se le agregan 6ml de KCl anotando suspensión de hígado.
Se prepara una serie de 6 tubos y se añaden lossiguientes reactivos

REACTIVO/ TUBO
1
2
3
4
5
6
Azul de metileno o.oo2M
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
Succinato de sodio
---
0.5
0.5
--
0.5
0.5
Malonato de sodio
---
--
0.5
---
---0.5
Agua destilada
1.5
1
0.5
1.5
1.0
0.5
Suspensión de hígado
0.5
0.5
0.5
---
--
--
Sobrenadante de hígado
--
--
--
0.5
0.5
0.5
Mezclar bien el contenido de cada tubo.
Vaselina0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Incubar 30 min entre 37 y 40°

Resultados
Tiempo/tubo
1
2
3
4
5
6
0 min
x
x
x
x
X
X
1o min
x
X
x
X
X
X
20 min
X
x
X
x
X
X
30 min
X
xx
xx
X
x
Se anexa imagen para demostrar color de reacción pasados los 30 minutos.(Fig1)


Fig 1
En esta imagen de izquierda a derecha se observan los tubos del 1 al 6

El tubo 2 es el que tieneun color ligeramente más intenso.

Los resultados serán explicados más adelante.

-¿En cuál de las fracciones de hígado deben encontrarse las mitocondrias y por qué?
En la suspensión ya que comofue centrifugado dos veces en la primera debieron separas e los núcleos y el precipitado que volvimos a llevar a centrifugar contenía las organelas posteriormente en el segundo centrifugado en elprecipitado (suspensión) quedan las mitocondrias y en el sobrenadante el resto de los componentes celulares.
-Describa como actúa el malonato en esta reacción
Inhibe a la succinato deshidrogenasa que...