Guía Lab

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE
CENTRO NACIONAL DE HOTELERÍA, TURISMO Y ALIMENTOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS

1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos para la preparación, esterilización, conservación y
control de calidad de medios de cultivos, homogeneizados y reactivos en el
laboratorio de microbiología.
2. GENERALIDADES Y DEFINICIONES
ASPECTOS A TENER ENCUENTA PARA LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVOS.
 Utilizar preferiblemente, los medios de cultivo deshidratados que ofrecen las
firmas comerciales, pero se pueden preparar en el laboratorio a partir de los
componentes especificados en la formulación.
 Los componentes que están en pequeñas concentraciones o son poco
solubles, es mejor añadirlos en forma de soluciones acuosas filtradas,
solucionesalcohólicas o alcalinas.
 Los componentes como: hidratos de carbono, yema de huevo y sulfito sódico
deben prepararse a parte de los demás componentes del medio, y ser
añadidos al medio de cultivo base en condiciones asépticas.
 Disolver los medios por calentamiento hasta ebullición en constante agitación.
 Dejar enfriar los caldos a temperatura ambiente y los medios de cultivos a
50ºC, antes deutilizarlos.
 Ajustar el pH del medio agregando solución NaOH o HCl 0.1N según el caso.
Si el pH obtenido es ácido, agregar solución NaOH hasta ajustar. Si el pH es
alcalino agregar solución HCl hasta ajustar.
 Dejar secar las placas con medios de cultivo, al lado del mechero con las cajas
de petri destapadas.
 Cerrar muy bien los tubos y recipientes con soluciones o caldos de cultivo, paraevitar derramamiento por el efecto de la ebullición.
 Conservar los medios y reactivos en sus envases originales, a temperatura no
mayor a 30 °C fuera de la exposición a la luz y la humedad.
 Conservar los medios y caldos de cultivos preparados, en la nevera entre 2 y 6
°C de temperatura.
 No utilizar los medios de cultivo deshidratados que presenten alteraciones de
color, que se observenapelmazados o que superen la vigencia establecida por
la casa comercial.
 Seguir las indicaciones del fabricante para la rehidratación y esterilización de
los medios de cultivo.
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CONTROL NEGATIVO: Una cepa cuyo crecimiento y comportamiento no puede
evidenciarse, debido a sus características fisiológicas y bioquímicas, en el medio
de cultivo utilizado para el analito en cuestión.
CONTROLPOSITIVO: Una cepa cuyo crecimiento es favorable, en el medio de
cultivo utilizado para el analito en cuestión.
CULTIVO: Es un método utilizado para la multiplicación de microorganismos, tales
como bacterias y hongos, en el que se prepara unas condiciones óptimas para
favorecer el proceso deseado. Pueden ser de dos tipos:
 Caldos de cultivo: Son cultivos de crecimiento líquidos y generalmente sepreparan en tubos de ensayos.
 Medios de cultivos: Son cultivos de crecimiento sólidos y generalmente se
preparan en cajas de petri grande y pequeñas, se solidifican a una
temperatura menor de 45 °C.
DILUYENTE: Es una solución preparada a partir de unos componentes básicos,
cuya función radica en disminuir las concentraciones microbianas de una
población, para poder ser examinadas en ellaboratorio. Ejemplo: Solución
peptona 0,1 %, solución salina 0,85 %.
FUNDIR: Acción en la que se transforman los medios de cultivos sólidos y
semisólidos, a el estado líquido para permitir su manipulación en las actividades
de realización de ensayos.
SOLUCIÓN: Es una mezcla homogénea a nivel molecular o iónico de dos o más
sustancias, que no reaccionan entre sí.
3. NORMAS DE SEGURIDAD
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Lavarse lasmanos antes y después de realizar las labores de limpieza.
Usar bata blanca, guantes, mascarilla, gorro y lentes de protección.
No comer, beber, fumar, aplicarse maquillaje o cremas en el área de trabajo.
No almacenar alimentos y bebidas en refrigeradores donde se encuentren los
elementos y productos de limpieza y desinfección.

4. MATERIALES Y EQUIPOS
Frascos de vidrio con tapa rosca
Agar SPC...