Gu A Pr Ctica Detectar Procesos Infecciosos

INTRODUCCIÓN
A casi 40 años de la publicación del primer inmunoensayo práctico revelado con una reacción enzimática y designado de modo exótico con un nombre de mujer1 (moda que continuó después con otros diseños de ensayos de similar principio), esta variante de inmunoanálisis cuenta con niveles de detección corrientemente inferiores al nanogramo y las variantes miniaturizadas con sistemas derevelado amplificados están alcanzando la casi inimaginable cota de los atogramos. Ya desde finales de la década de los sesenta del siglo pasado se venía intentando la sustitución de los controvertidos isótopos radiactivos como elementos de revelado en los inmunoensayos.2 Pero es, en realidad, a partir de esta denominación de "ELISA" cuando ocurre una avalancha diversa y entusiasta de diseñosoriginales y aplicaciones que han hecho de esta plataforma analítica una extraordinaria, práctica y masiva forma de cualificar y cuantificar antígenos y anticuerpos, sobre todo, después de la introducción de la versión microanalítica por Alister Voller a finales de la década de los setenta3 con su práctica y versátil modularidad
Esta revisión pretende incursionar y actualizar algunos formatoscorrientemente utilizados para este tipo de ensayos, con el aporte de los resultados del autor y su discusión en el contexto de otros similares que a lo largo se estos años han enriquecido el arsenal de variantes desde aquella de 1971, precursora y muy visionaria.
1. INMUNOENSAYOS DIRECTOS
1.1. Electroinmunoensayos. Inmunoensayo potenciométrico de enzima ligada (IPELI) para la detección del subtipo «ad»del antígeno de superficie de la hepatitis B como una alternativa a los inmunoensayos enzimáticos.
Los inmunoensayos electroquímicos pueden ser directos cuando se utilizan transductores potenciométricos, amperométricos o capacitivos que indican la reacción antígeno anticuerpo sin otra reacción acoplada o accesoria. Estos ensayos se basan en la detección de cambios en la densidad de carga o en laconductividad de la transducción. El hecho de trabajar sin marcadores para revelar la reacción es muy atractivo, sobre todo en el desarrollo de inmunosensores in vivo que permiten una evaluación en tiempo real con la deseada ausencia de reactivos peligrosos y con la posibilidad de utilizar anticuerpos de no muy alta afinidad. Ya hace más de 30 añosJanata y otros detectaron un cambio de potencial convalor analítico cuando incubaron manano y concanavalina A inmovilizada en una membrana de PVC (polyvinyl chloride), que representa un antecedente importante para estos electroinmunoensayos de evaluación directa.4 En 1984, Keating y Rechnitz5 utilizaron un electrodo sensible a potasio con un conjugado dioxon-ionosforo en una membrana de PVC para detector anticuerpos anti-dioxina. Aun cuando algunaspublicaciones han informado resultados con efectos similares, no quedaba completamente claro si el cambio de potencial es el resultado de un disturbio en el transporte de iones o es el producto de cambios de carga en la superficie de la interacción de las proteínas.6
En los inmunoensayos electroquímicos indirectos el evento de unión molecular es visualizado mediante una reacción auxiliar con uncompuesto marcado. Los transductores amperométricos acoplados a la reacción son capaces de detectar 10-10 A en un rango lineal con potenciostatos comerciales.7 Debido a que los anticuerpos y los antígenos no son electroquímicamente activos con el potencial REDOX en el rango apropiado, es necesario acoplar compuestos activos REDOX como marcadores para la detección de la reacción antígeno-anticuerpo,de manera que cualquier unión inespecífica no contribuya a la señal de interés. En un ensayo amperométrico el compuesto REDOX marcador debe tener las propiedades siguientes: ser electroactivo en un rango de potencial entre 0 y 200 mV, no debe alterar el funcionamiento del electrodo, no tener reacciones colaterales con la matriz, ser estable en el tampón de reacción y tener disponibles grupos...