Gu A N 1 Cuantificacion Proteinas 2015

VICERRECTORÍA ACADÉMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA

GUÍA N°1
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
CQU310

2013 (Revisión 2015)

VICERRECTORÍA ACADÉMICA
INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES
CURSO DE BIOQUIMICA
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

OBJETIVOS:
1. Conocer diferentes métodos colorimétricos para cuantificar proteínas
2. Determinar espectrofotometricamentela concentración de albúmina sérica de bovino (BSA),
utilizando método de Lowry.

INTRODUCCION
La cuantificación de proteínas sirve para determinar la concentración de proteínas en una muestra. Se
usa comúnmente cuando se realiza una purificación de proteínas, esto para conocer la actividad
específica y el diagnóstico de enfermedades.
En general, no existe un método completamente satisfactorio paramedir la concentración de proteínas
en una muestra. La elección del método depende de la naturaleza de la proteína, de los otros
componentes, de la rapidez y sensibilidad deseada. Los métodos que se usan corrientemente para
medir concentraciones de proteínas son Método de Lowry, Método de Biuret, y Método de Bradford
entre otros.
• Metodo de Lowry:
Es un método de valoración cuantitativa de lasproteínas. A las muestras se le añade un reactivo que
forma un compuesto coloreado con las proteínas, siendo la intensidad del color proporcional a la
concentración de proteínas, según la ley de Lambert y Beer.
Algunos aminoácidos sufren reacciones característicos con ciertos reactivos debido a la naturaleza de
sus cadenas laterales. Muchas reacciones de este tipo se caracterizan por la formaciónde productos
coloreados. La tirosina por ejemplo, debido a su grupo hidroxifenilo, reacciona con una solución de
ácido fosfomolíbdico tungstico (Reactivo Folin-ciocalteau, color amarillo) en un medio cúprico alcalino,
produciendo una coloración azul, que absorbe a 650 nm.
El método consta de dos etapas:
1.- Reacción previa de la proteína en medio alcalino con iones Cu2+.
Los iones Cu+2,
presentesen el reactivo de cobre alcalino RCA, se unen a las proteínas formando complejos con
los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídico. Esos complejos Cu+2 - proteína tiene un color
azul claro. Además provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína,
exponiéndose los residuos fenolitos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la
reacción.

2.- Reacción dereducción del reactivo de Folin-ciocalteau, esta ocurre en un medio alcalino,
al oxidarse los grupos fenolitos de los residuos de tirosina, presente en la mayoría de las proteínas,
actuando el cobre como catalizador.

2013 (Revisión 2015)

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El principal constituyente del reactivo de Folin-ciocalteau es el acidoFosfomolibdotúngstico, de
color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenolitos da lugar a un complejo de color azul
intenso.

Sin embargo, debido a las diferencias en el contenido de tirosina de una proteína a otra, cantidades
iguales de proteínas distintas, producen coloración diferente con el reactivo de Lowry, motivo por el
cual no es posible obtener la concentración real de una muestra de proteína poreste método, aún así,
cuando se requiere una estimación relativa de la concentración de proteínas, este método es
ampliamente satisfactorio, debido a su alta sensibilidad. Sensibilidad de este método es de 10 gr de
proteínas por ensayo.
OTROS METODOS UTILIZADOS
• Método de Biuret:
Los componentes de la muestra a estudiar que tenga dos o más uniones peptídicas (por ejemplo:
tetrapéptidos,polipéptidos y proteínas) dan color púrpura característico cuando se tratan con solución
de sulfato de cobre diluida.
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu+2 y los grupos NH de los enlaces
peptídicos en medio básico. Un Cu+2 se acompleja con cuatro NH. La intensidad de coloración es
directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es...