Gui a 1 ELISA

Guía Nº 1 Modulo de Inmunología
BIO-456
Carrera de Tecnología Médica.
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS I: ELISA
Objetivos:
1.- Reconocer la utilidad de los anticuerpos como herramientas analíticas.
2.-Aprender conceptos teóricos detrás de ensayos inmunológicos.
3.- Constatar de manera experimental la utilidad de dichos ensayos en la
investigación científica y clínica.
Esquema general de losInmuno-ensayos
Los anticuerpos son capaces de reconocer con alta afinidad y especificidad
sus antígenos. Esta capacidad ha llevado a utilizarlos como herramientas en la
detección y cuantificación de proteínas deinterés.
La muestra que contiene la proteína es contactada por el anticuerpo que la
reconoce y que está unido a algún sistema de detección. Luego se revela
adecuadamente lo que nos permitirá observar lapresencia de la proteína de
interés. La idea es ensamblar un complejo inmune de detección como sigue:

Sistemas de Detección
Fluorescentes: Usualmente se ocupan para visualizar moléculas en tejidoso
células. Se unen covalentemente al anticuerpo detector y permiten visualizar
por microscopía de fluorescencia al excitar el fluoróforo. Especies
fluorescentes comunes usadas con anticuerpos son lafluoresceína
isotiocianato (FITC) y la Rodamina.
Enzimáticos: Ocupan enzimas acopladas al anticuerpo y mediante sustratos
específicos, catalizan una reacción que produce sustancias coloreadas,
mediblespor espectrofotometría o que pueden observarse a simple vista.
Enzimas comunes son la Peroxidasa de Rábano (HRP) y la Fosfatasa
Alcalina (AP).

ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNO SORBENT ASSAY)
El ELISA esuna técnica analítica de cuantificación, utilizando un anticuerpo
para cuantificar una proteína específica. Se hace en microplacas de 96
pocillos donde se siembra la muestra, luego se incuba elanticuerpo en una
dilución adecuada y finalmente se revela.

El color es medible por un espectrofotómetro, que arroja valores de
absorbancia, la cual es directamente proporcional a la concentración de...