Guia 1
Páginas: 8 (1968 palabras)
Publicado: 17 de marzo de 2010
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
MICROBIOLOGIA GENERAL
Prof: Claudia Elizabeth Díaz C.- Microbióloga Industrial PUJ
PRACTICA # 3
PREPARACION DE EXTENDIDOS Y TECNICAS DE TINCION
OBJETIVOS:
• Conocer el microscopio y sus partes
• Adquirir destreza en el manejo del microscopio
• Aprender y practicar las diferentes técnicas de tinción
• Establecer la importancia y elprincipio básico de cada una de las coloraciones que se van a realizar
• Identificar al microscopio las diferentes formas y agrupaciones bacterianas
INTRODUCCION
Los microorganismos son estudiados a nivel de microscopio para identificar en ellos forma, tamaño, agrupación, comportamiento tintorial y la presencia de ciertas estructuras como pared celular, capsula, esporo flagelo y gránulos. Atodas estas características se les puede agrupar bajo el nombre de anatomía bacteriana o citología bacteriana.
El conocimiento de las bacterias como microorganismos causantes de diferentes patologías debe comenzar por el estudio de su morfología y estructura fina; por ello, la anatomía o citología bacteriana, busca profundizar no solamente en las diversas estructuras bacterianas, sino tambiénen la función que estas cumplen. Entre las características morfológicas que se estudian figuran tamaño, forma y tipo de agrupación.
La tinción de microorganismos esta basada en el uso de técnicas rápidas y sencillas establecidas para determinar características morfológicas e incluso fisiológicas de los microorganismos. Estas técnicas son la base de los estudios taxonómicos y permiten realizarobservaciones bajo el microscopio de inmersión.
Las coloraciones se clasifican en cuatro tipos:
Coloraciones simples: Son básicas o acidas o de diferentes colorantes. Los colorantes son usualmente sales de las cuales uno de los iones se colorea. Una sal contiene un ion cargado + y otro -. A pH cercanos a neutro la mayoría de las células tienen una carga ligeramente negativa. Ej: azulde metileno.
Coloraciones diferenciales: Se basan en la caracterización de los microorganismos por las propiedades físicas y químicas de los mismos, mediante la utili8zacion de varios colorantes. Ej: Coloración de gram
Coloración de estructuras: Demuestra la presencia de ciertos elementos ultraestructurales dentro de la células. La coloración de endo0sporas detecta la presencia deesporas internas en la célula, estructuras altamente resistentes, producidas por diferentes géneros bacterianos (Bacillus sp.)
Coloraciones microquimicas: permite detectar ciertos compuestos químicos producidos dentro de las células. Como por ejemplo se considera la coloración negro sudan.
PROCEDIMIENTO:
I. PREPARACION DEL FROTIS:
La mayoría de estos procedimientos de coloraciónrequieren la preparación previa de un frotis, donde se fijan los microorganismos a la lámina lo suficiente para evitar ser arrastrados durante el proceso de tinción. Durante la fijación las células se mueren, se coagulan y se adhieren a la lámina.
1. Limpie las láminas de vidrio y objetivos. Para limpiar las laminas utilice jabón abrasivo, el cual es posteriormente retirado con abundanteagua, de ser posible destilada. Posteriormente, se enjuagan las láminas con etanol al 95% y se dejan secar al aire, para luego pasarlas por la llama y dejarlas enfriar.
2. Si se hace el frotis a partir de un caldo de cultivo, coloque una o dos gotas del caldo en el centro de la lámina, en condiciones de esterilidad. Si el cultivo proviene de un medio solido, agregue primero una gota de aguao solución salina y transfiera una pequeña parte de la colonia al agua y mezcle el cultivo perfecta y homogéneamente con el agua.
3. Extienda completamente la gota hasta formar una película delgada.
4. Déjela secar y pase la lamina tres veces por la llama (con el frotis hacia arriba). Tenga cuidado de no sobrecalentar el frotis. Cuando esté suficientemente frio proceda a realizar la...
MICROBIOLOGIA GENERAL
Prof: Claudia Elizabeth Díaz C.- Microbióloga Industrial PUJ
PRACTICA # 3
PREPARACION DE EXTENDIDOS Y TECNICAS DE TINCION
OBJETIVOS:
• Conocer el microscopio y sus partes
• Adquirir destreza en el manejo del microscopio
• Aprender y practicar las diferentes técnicas de tinción
• Establecer la importancia y elprincipio básico de cada una de las coloraciones que se van a realizar
• Identificar al microscopio las diferentes formas y agrupaciones bacterianas
INTRODUCCION
Los microorganismos son estudiados a nivel de microscopio para identificar en ellos forma, tamaño, agrupación, comportamiento tintorial y la presencia de ciertas estructuras como pared celular, capsula, esporo flagelo y gránulos. Atodas estas características se les puede agrupar bajo el nombre de anatomía bacteriana o citología bacteriana.
El conocimiento de las bacterias como microorganismos causantes de diferentes patologías debe comenzar por el estudio de su morfología y estructura fina; por ello, la anatomía o citología bacteriana, busca profundizar no solamente en las diversas estructuras bacterianas, sino tambiénen la función que estas cumplen. Entre las características morfológicas que se estudian figuran tamaño, forma y tipo de agrupación.
La tinción de microorganismos esta basada en el uso de técnicas rápidas y sencillas establecidas para determinar características morfológicas e incluso fisiológicas de los microorganismos. Estas técnicas son la base de los estudios taxonómicos y permiten realizarobservaciones bajo el microscopio de inmersión.
Las coloraciones se clasifican en cuatro tipos:
Coloraciones simples: Son básicas o acidas o de diferentes colorantes. Los colorantes son usualmente sales de las cuales uno de los iones se colorea. Una sal contiene un ion cargado + y otro -. A pH cercanos a neutro la mayoría de las células tienen una carga ligeramente negativa. Ej: azulde metileno.
Coloraciones diferenciales: Se basan en la caracterización de los microorganismos por las propiedades físicas y químicas de los mismos, mediante la utili8zacion de varios colorantes. Ej: Coloración de gram
Coloración de estructuras: Demuestra la presencia de ciertos elementos ultraestructurales dentro de la células. La coloración de endo0sporas detecta la presencia deesporas internas en la célula, estructuras altamente resistentes, producidas por diferentes géneros bacterianos (Bacillus sp.)
Coloraciones microquimicas: permite detectar ciertos compuestos químicos producidos dentro de las células. Como por ejemplo se considera la coloración negro sudan.
PROCEDIMIENTO:
I. PREPARACION DEL FROTIS:
La mayoría de estos procedimientos de coloraciónrequieren la preparación previa de un frotis, donde se fijan los microorganismos a la lámina lo suficiente para evitar ser arrastrados durante el proceso de tinción. Durante la fijación las células se mueren, se coagulan y se adhieren a la lámina.
1. Limpie las láminas de vidrio y objetivos. Para limpiar las laminas utilice jabón abrasivo, el cual es posteriormente retirado con abundanteagua, de ser posible destilada. Posteriormente, se enjuagan las láminas con etanol al 95% y se dejan secar al aire, para luego pasarlas por la llama y dejarlas enfriar.
2. Si se hace el frotis a partir de un caldo de cultivo, coloque una o dos gotas del caldo en el centro de la lámina, en condiciones de esterilidad. Si el cultivo proviene de un medio solido, agregue primero una gota de aguao solución salina y transfiera una pequeña parte de la colonia al agua y mezcle el cultivo perfecta y homogéneamente con el agua.
3. Extienda completamente la gota hasta formar una película delgada.
4. Déjela secar y pase la lamina tres veces por la llama (con el frotis hacia arriba). Tenga cuidado de no sobrecalentar el frotis. Cuando esté suficientemente frio proceda a realizar la...
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