Guia de microbiologia

TINCIÓN DE GRAM



BURGOS MURILLO JUAN ANDRÉS
JABIB SALGADO KIARA ZARETH
MAZO VILLADIEGO PEDRO JOSÉ
PEÑATA MEJÍA ZORAIDA YANETH




MSc. LUIS ENRRIQUE OVIEDO



UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
PROGRAMA BIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
MONTERÍA
I SEM 2014

INTRODUCCIÓN
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con elmicroscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodosque no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram.
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado para la visualización de bacterias. Su nombre se debe al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a lamorfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. Este método basa su distinción en la estructura diferente de la pared bacteriana de las bacteria Gram + (pared másgruesa, y una sola capa de peptidoglicano) y de las Gram- (pared más delgada y dividida en dos partes).

El procedimiento y sustancias usadas son:

Colorante básico Cristal Violeta o Violeta de Genciana. Es el primer colorante que se echa sobre el frotis previamente preparado. Es un colorante selectivo que tiñe a todos los microorganismos. Se deja actuar durante un minuto y se lava con agua acontinuación.

Lugol. Producto compuesto de yodo y yoduro potásico. Es un mordiente, que intensifica al Cristal Violeta haciendo que precipite. Se deja actuar un minuto y se lava con alcohol, el tiempo justo para que no se arrastre el colorante del todo.

Alcohol acetona. El alcohol retira el colorante de las gram- debido a su diferente estructura de la pared celular (tamaño de los poros).Safranina. Colorante básico diferenciador. Tiñe a las bacterias Gram -. Se deja actuar treinta segundos y se lava con agua.

Una vez finalizada la tinción las bacterias Gram- estarán teñidas de un color rosáceo, y la Gram + de un color violeta. Esto sirve para diferenciarlas claramente al microscopio óptico. Para ello es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.MATERIALES Y METODOS

Cultivos bacterias Gram (+) y Gram (-).
Portaobjetos.
Papel absorbente.
Mecheros.
Puentes de coloración.
Aceite de inmersión.
Microscopio.
Cristal Violeta.
Lugol.
Safradina.
Alcohol acetona.
Asas.
Agua destilada.
El método utilizado para tinción de Gram de las bacterias Escherichia coli y Staphylococcus aureus fue:
1. Se extendió y se fijó lamuestra.
2. Se cubrió con cristal violeta, dejándolo actuar durante un minuto.
3. Se lavó el exceso de colorante con agua.
4. Se cubrió el extendido con (Lugol). Durante 1 minuto. Este actúa como un mordiente.
5. Se lavó con agua.
6. Se decoloro con alcohol acetona durante 10 a 15 segundos aproximadamente
7. Se lavó con agua.
8. Se cubrió el extendido con safranina y se dejó actuar durante unminuto.
9. Se lavó con agua, se secó a temperatura ambiente para luego observar al microscopio con el objetivo de inmersión.

RESULTADOS Y ANÁLISIS

Staphylococcus aureus: Es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva, productora de coagulasa, catalasa, inmóvil y no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimándose que una de cada tres personas se hallan...