Guia Fitoquímica






UNIVERSIDAD DEL NORTE
GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS



CARRERA DE QUÍMICA Y FARMACIA
CÁTEDRA DE FITOQUÍMICA



AÑO: 2014

PRÁCTICA Nº1: EXTRACIÓN DE LAPACHOL DEL ASERRÍN DE LAPACHO
OBJETIVOS: Extraer un metabolito secundario a partir del material vegetal molido.
Identificar los factores influyentes en el rendimiento de la extracción.Valorar la importancia de las normas de bioseguridad durante el procedimiento extractivo.
Reactivos: hidróxido de sodio 1N, 500 mL
Ácido clorhídrico al 20% 250mL

Materiales: Embudo de decantación de 500mL, Probeta de 100mL, varilla de vidrio, algodón o gasa, guantes, kitasato, embudo buchner, bomba de vacio, papel indicador de pH, papel de filtro cualitativo,placa de Petri, Pizetas con agua destilada.
PROCEDIMIENTO
Se pesan 100g de aserrín de lapacho, (asegurarse de que no tenga contaminantes de otras maderas), pasar a un embudo de decantación de 500mL con una torunda de algodón como filtro colocado en la base, agregar 500 mL de NaOH 1N. Dejar reaccionar 15 mín con agitación constante.
La solución adquiere una coloración rojo vino, que antiguamentese utilizaba como colorante, por tanto, utilizar guantes en los pasos siguientes.
Filtrar la mezcla a través del algodón.
Recoger el filtrado en un Erlenmeyer de 500mL
Al filtrado agregarle ácido clorhídrico 20% hasta llegar a un pH=2
Filtrar al vacío a través de papel de filtro cualitativo previamente tarado, lavar el residuo con agua varias veces (Mínimo 4 lavados de 50mL de agua destilada)Secar el residuo obtenido y guardar en una placa de Petri con tapa.
Guardar en desecador de ser posible.


PRÁCTICA N°2: PURIFICACIÓN DEL LAPACHOL
OBJETIVO: Identificar los métodos de aislamiento y análisis de principios activos.
Reactivos: Diclorometano
Hexano
Acetato de etilo
Placas de Cromatografía en capa fina
Sílica gel
EtanolMateriales:
1-)Para la semipurificación por diferencial de pH: Embudo de decantación de 500mL, varilla de vidrio, kitasato, embudo Buchner, bomba de vacio, papel indicador de pH, papel de filtro, Erlenmeyer de 500mL, Probeta de 100mL, Vasos de precipitados de 250mL, espátula metálica.
2-)Para la recristalización: placa de Petri (Grande), Plancha calefactora, vaso de precipitados de 500mL,kitasato, embudo Buchner, bomba de vacío.
3-)Para la TLC: Placas de TLC, Tubos capilares, Cuba de elución, probetas de 50mL, vaso de precipitados de 100mL, espátula metálica.
4-)Para la columna: Soporte universal, Pinza doble nuez, Algodón, bureta de 25ml, vaso de precipitados de 100ml, de 250ml, varilla de vidrio, pipeta Pasteur, Silica gel, 20 tubos de ensayo, placas de TLC, cubas para elución,tubos capilares.
Para la semipurificación por diferencial de pH
Una vez obtenido el extracto sólido de lapachol impurificado se procede a re-disolver el residuo en 200mL de acetato de etilo.
Verter la disolución en un embudo de decantación de 500mL y añadir a la misma, 75mL de una solución acuosa de bicarbonato sódico al 3%, decantar la fase acuosa (Que contiene las sales de ácidos fuertes). OJONO DESECHAR NADA AÚN.
A la fase orgánica remanente en el embudo añadir 75mL de una solución de hidróxido de sodio 1M (Extracción de los ácidos débiles). Repetir el proceso 2 veces como mínimo.
Decantar la fase acuosa a un recipiente de vidrio adecuado (Vaso de precipitados o Erlenmeyer) y añadir gota a gota una solución de ácido clorhídrico al 20% hasta llegar a un pH de 2 aproximadamente.Filtrar la solución al vacío y conservar el residuo sólido de color amarillo.
Recristalización
El residuo se re disuelve en diclorometano (Calentar a 50°C de ser necesario) en el menor volumen posible, filtrar al vacío (en frío) y verter en una caja de Petri (grande).
Calentar a baño María la placa de Petri para evaporar el disolvente y posterior formación de cristales de lapachol. Una vez...