guia laboratorio microbiologia

1. INTRODUCCIÓN

La familia de Enterobacteriaceae está compuesta por bacilos Gram negativos de tamaño mediano, anaerobios facultativos, móviles o inmóviles, pero no esporulados. Las Enterobacterias crecen bien en medios artificiales, tienen necesidades nutritivas simples, fermentan la glucosa con producción de ácido o ácido y gas, reducen los nitratos a nitritos y son oxidasa negativos. Lasenterobacterias son organismos ubicuos de distribución, encontrándose en el suelo, el agua, la vegetación y formando parte de la flora bacteriana normal de casi todos los animales, incluido el ser humano.

Algunos miembros de esta familia se encuentran asociados a cuadros infecciosos del tracto gastro intestinal, mientras que otros pueden producir infecciones oportunistas. Las infecciones puedenafectar a casi todas las localizaciones del cuerpo.

2. OBJETIVOS

Realizar pruebas bioquímicas para la identificación de cepas conocidas de Enterobacterias para lograr una correcta identificación de género y especie.

3. CONSULTAS PRELIMINARES

Los estudiantes deberán consultar sobre las características de las Enterobacterias y su importancia como bioindicadores de la calidadbacteriológica del agua.

4. MATERIALES
Por cada grupo de trabajo se tendrá:

MATERIAL
CANTIDAD
Cajas de Petri
2
Tubo de ensayo con tapa
16
Asa bacteriológica
1
Mechero
1
Cultivo bacteriano
1

5. REACTIVOS

SUSTANCIAS*
CANTIDAD
Agar McKonkey
30 ml
Agar TSI
10 ml
Agar para Lisina descarboxilasa
10 ml
Agar citrato de Simmonds
10 ml
Agar SIM
10 ml
Caldo MRVP
20 ml
Agar SS
10ml
Reactivo de Kovac´s
10 ml
Reactivo de Barrit´s
10 ml
Rojo de Metilo
10 ml

No hay restricción de seguridad por el uso de los medios de cultivo.

Los reactivos requeridos se entregan ya preparados en recipientes debidamente marcados para el uso de los estudiantes según lo previsto en la guía de la práctica.

6. EQUIPOS

EQUIPOS*
CANTIDAD
Incubadora
1

El equipo deberá estarpreviamente calibrado a la temperatura requerida por el Auxiliar de Laboratorio. Favor no manipular el equipo y mantenerlo cerrado. Abrir solamente para incluir el cultivo a incubar.

7. PROCEDIMIENTO

Desarrolle el siguiente procedimiento:

Tome una colonia aislada del medio sólido con el cultivo del microorganismo suministrado y proceda a realizar una siembra por estrías en agar Mc Conkey,medio diferencial que nos separa las colonias fermentadoras de lactosa de las que no lo hacen. Incubar a 37 °C por 18 - 24 h.
Pasado el tiempo de incubación observar morfología, tamaño, aspecto y color de las colonias. Aquellas que presentan color rosado habrán fermentado la lactosa.
De las colonias aisladas, procedentes del agar Mc Conkey sembrar en tubos de ensayo con diferentes medios decultivo para realizar las siguientes pruebas bioquímicas:

TSI: Contiene glucosa, (0.5-1% fenol), sacarosa y lactosa. Además rojo de fenol, que indica fermentación y sulfato ferroso, para demostrar la producción de H2S. La siembra se hace punzando con el asa recta en profundidad y en estría en la superficie (agar inclinado).

Reacción
Interpretación
Fondo ácido* superficie inclinada alcalinaFermentación a glucosa (K/A)
Todo el medio ácido*
Fermentador de glucosa, lactosa (A/A)
Burbujas
Aerógenos
Ennegrecimiento del fondo
H2S
Medio alcalino**
No fermentador de azúcar (K/K)
** alcalino – rojo *Acido-Amarillo

Lisina decarboxilasa: La decarboxilación es el proceso por el cual las bacterias que poseen la enzima decarboxilasa específica son capaces de atacar a losaminoácidos en su grupo carboxilo (-COOH), dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. Se siembra igual que el TSI.

Interpretación: La prueba es positiva cuando hay cambio de color del púrpura a amarillo apagado (producido por la cadaverina); la prueba es negativa cuando no hay cambio de color. Se reporta con las mismas convenciones que el TSI.

Citrato de Simmons: Contiene citrato como...