Guia Medios Y Reactivos Micro Alimentos Web

Microbiología de
Alimentos
Dpto. Química Orgánica

GUIA DE REACTIVOS, MEDIOS DE
CULTIVO Y MÉTODOS DE TINCIÓN

METODOS DE TINCION

TINCION DE GRAM-NICOLE
-Primer colorante: Violeta de Genciana
Solución A:
Violeta de Genciana ....................................... 1,0 g
Alcohol etílico .............................................. 10,0 ml
Solución B:
Fenol............................................................... 1,0 g
Agua destilada ............................................ 100,0 ml
Se mezclan las soluciones A y B
-Mordiente: Solución de Lugol
Yodo ............................................................... 1,0 g
Yoduro de Potasio .......................................... 2,0 g
Agua destilada ............................................ 300,0 ml
Se disuelve primero elyoduro en poca agua, se agrega luego el yodo y una vez disuelto
se agrega el resto del agua.
-Segundo colorante (de contraste): Fucsina Básica
Fucsina Básica ................................................ 0,1 g
Agua destilada ............................................ 100,0 ml
Método:
1- Extender y fijar el material sobre un portaobjetos limpio, desengrasado y seco.
2- Cubrir el preparado duranteun minuto con el primer colorante, volcar el colorante y
lavar con agua corriente.
3- Cubrir el preparado con el mordiente, dejarlo actuar por un minuto y volcar el
exceso.
4- Decolorar con alcohol y lavar con agua.
5- Colorear durante 30 segundos con el segundo colorante, lavar con agua y secar.
6- Examinar al microscopio usando objetivo de inmersión.

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TINCION NEGATIVA
Es un método muysencillo y eficaz para poner de manifiesto la forma externa de las
bacterias en un extendido. Las bacterias quedan rodeadas de una fina capa de colorante
negro y aparecen como objetos blancos sobre fondo gris.
Método:
1- Se prepara un extendido muy fino de la forma habitual utilizando un portaobjetos
limpio, desengrasado y seco.
2- Se coloca en un extremo del portaobjetos una gota de solución denigrosina al 10%.
3- Se toma otro portaobjetos y se apoya sobre el primero formando un ángulo de 30° y
tocando la gota de nigrosina. Luego se pasa resbalando, arrastrando la gota de
nigrosina, de forma que se extienda por toda la superficie del portaobjetos. De esta
manera, el extendido queda cubierto de una fina película de colorante.
4- Se deja secar el colorante y se examina la preparación conobjetivo de inmersión.

DEMOSTRACION DE CAPSULAS BACTERIANAS
Método de la Nigrosina
La técnica de tinción negativa puede usarse en conjunción con una técnica de tinción
simple con el fin de poner de manifiesto la presencia de cápsulas. En este caso, el
extendido debe cubrirse con fucsina fenicada diluida, lavarse y secarse, antes de hacer el
tratamiento con nigrosina.
Método con Tinta China
1- Se colocaun ansa de tinta china sobre un portaobjetos muy limpio.
2- Se mezcla con la tinta china una pequeña porción del cultivo bacteriano o de la
suspensión.
3- Se coloca un cubreobjetos sobre la mezcla, cuidando que no se formen burbujas de
aire, y se presiona firmemente con un papel de filtro hasta que la película de líquido
sea muy fina.
4- Se examina con objetivo seco de gran aumento o con objetivode inmersión.
La cápsula se verá como una zona clara en torno a la bacteria.
Nota: Siempre debe prepararse y examinarse una película de tinta china como testigo.

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TINCION DE ESPORAS BACTERIANAS
Técnica de Wirtz, modificada por Shaeffer y Fulton
-Solución acuosa de Verde de Malaquita al 5%.
-Solución acuosa de Safranina al 0,5%.
Método:
1- Extender y fijar el material sobre un portaobjetoslimpio, desengrasado y seco.
2- Verter la solución de Verde de Malaquita sobre la preparación, calentar hasta
emisión de vapores durante 5 minutos (no hervir). Lavar con agua.
3- Colorear por 30 segundos con la solución de Safranina. Lavar con agua y secar.
4- Observar al microscopio con objetivo de inmersión. Las esporas aparecen coloreadas
en verde y los cuerpos de las bacterias en rojo.

TINCION...