Guia Practicas Biotecnolog a Vegetal ULA

GUÍA DE PRÁCTICAS
BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

Docentes: B.Q. Soledad Rivera Lersundi
Anita Bravo Maldonado

CONTENIDO
Actividad Practica 1. Preparación de las soluciones madre para Medios de Cultivos
para tejido vegetal in vitro.
Actividad Practica 2. Preparación de los Agares para cultivo de tejido vegetal in
vitro.
Actividad Practica 3. Cultivo in vitro de plantas (semilla).

Actividad PrácticaN°1:
Preparación de soluciones madre para los medios de cultivo
INTRODUCCION:
Son muchos los componentes de un medio para cultivar material vegetal "in vitro": por
ejemplo, se encuentran las sales minerales que incluyan todos los elementos esenciales
tanto micro como macronutrientes, las vitaminas tales como riboflavina, tiamina,
piridoxina,
ácido
nicotínico,
ácido
pantoténico,
biotina,
y
ácidofólico.
Aminoácidos tales como L-glutamina, asparragina y cisteína, los hexitoles como
mioinositol, hormonas y reguladores del crecimiento, una fuente de carbono y un agente
gelificante.
Un método de hacer menos tedioso el trabajo consiste en preparar lo que se conoce
como "soluciones madre" de algunos de estos componentes. Estas soluciones tienen una
concentración que suele ser 10, 100 e incluso 1000veces superior a la concentración final
del medio. Su ventaja no estriba sólo en el hecho de que hay que pesar menos veces
cada vez que se prepara el medio sino también la exactitud de la pesada ya que algunos
compuestos están tan diluidos en la solución final, que la pesada que habría que hacer
estaría por debajo de los límites de exactitud de las balanzas de precisión.
Las soluciones madre seconservan en frio y en frascos color ámbar durante algunos
meses,
desechándose
ante
cualquier
señal
de
precipitación.
Se suelen preparar soluciones madre de las sales minerales, los aminoácidos, hormonas,
vitaminas y hexitoles, mientras que la fuente de carbono y el agente gelificante se pesan
cada vez ya que se necesitan en cantidades muy elevadas y no se conservan bien en
solución.
En el caso delas hormonas es mejor preparar una solución madre de cada una de ellas y
medir volúmenes determinados y congelarlos.
OBJETIVO:
Que el alumno obtenga un conocimiento práctico sobre los diversos métodos de
preparación de medios de cultivo para propagación de tejido vegetal in vitro.
Materiales:
Frascos de cristal o de plástico (preferiblemente de los primeros por su transparencia),
que en algunoscasos habrán de ser de color ámbar para proteger de la luz determinados
compuestos que son fotosensibles.
Balanza granataria
Balanza analítica
Espátulas de distinto tamaño para pesar
Embudos
Agitador magnético
Imanes

Vasos de precipitados
Probetas
Matraces aforados
Tubos Eppendorf
Compuestos químicos
Agua destilada
Autoclave
Termoplato
Algodón
Gasas
Placas petri estériles
Tubos de ensayo con tapaProcedimiento:
Se establecerán los equipos de trabajo por cada grupo de prácticas
Normas generales a la hora de pesar
- Se debe comprobar los cálculos. Tener en cuenta que los valores de las soluciones
madre están expresados para un litro.
- Debe leer las características del reactivo que se va a pesar. Algunos son tóxicos por
inhalación o en contacto con la piel y hay que mantener las debidasprecauciones.
- Para medidas desde 0.01 g se utilizará la balanza granataria. Para valores inferiores la
balanza analítica.
- Antes de pesar hay que tarar el recipiente donde se está haciendo la pesada. Nunca se
debe pesar directamente sobre el platillo de la balanza, favor de colocar algo adecuado
para pesar las distintas sustancias.
- Antes de introducir la cucharilla de pesar en un frasco de reactivohay que asegurarse de
que esté limpia y seca. Es una precaución que evita la contaminación de los reactivos.
- Hay que tener la precaución de tomar del frasco de reactivo muy poca cantidad de modo
que en la medida de lo posible se evite devolver al frasco parte de lo que se tomó.
Normas generales a la hora de preparar las disoluciones
- Si la disolución se va a remover con un agitador...