Guia Tp Laboratorio

Química Biológica I


Segundo Cuatrimestre 2011










Guía TP Laboratorio








































TRABAJO PRÁCTICO: REPASO DE DILUCIONES


Primera parte

Objetivos: entrenamiento en la selección del material a utilizar para realizar diluciones

1) ¿Qué material volumétrico elegiría para tomar lossiguientes volúmenes? Realizarlo

|Volumen a emitir |Pipeta |
|10 ml (exactos) | |
|3,6 ml ( 0,1 ml ||
|9,3 ml ( 0,1 ml | |
|5 ml (exactos) | |
|0,085 ml ( 0,001 ml ||
|0,25 ml ( 0,01 ml | |

2) Medir exactamente 5 ml de una solución de colorante y llevar a un volumen final de 50 ml (exactos) con agua destilada.
De acuerdo al siguiente material propuesto marcar con una cruz cuál es elcorrecto. Justificar.
• Pipeta graduada de 10 ml
• Pipeta aforada de 5 ml
• Matraz de 50 ml
• Pipeta graduada de 5 ml
• Vaso de precipitado de 50 ml
• Bureta de 100 ml
• Probeta de 100 ml












Segunda parte



Objetivos

o Incrementar la destreza en la realización de diferentes diluciones
o Iniciarse en el uso de pipetas automáticasA) Se dispone de una solución concentrada coloreada (A) y se opera sobre ella según el siguiente esquema

[pic]
a) Determinar la dilución realizada en cada paso
b) Determinar la concentración (en función de A) de las soluciones generadas en el esquema e identifique los procedimientos que permiten preparar soluciones de la misma concentración.
c) Identifique con+++++, +++, ++, + las diluciones en función de la intensidad de color que espera observar.
d) Reproduzca las operaciones del esquema con la solución stock que le proveerán los auxiliares docentes de su comisión y compare la intensidad de color con el esquema armado en c).
e) ¿Cuál es el tubo que tiene la solución más diluída? Y la más concentrada?

B) A partir de la mismasolución madre inicial anterior, preparar:
• 2 ml de una dilución 1/10
• 5 ml de una dilución 1/20
• 1 ml de una dilución 1/100
• 10 ml de una dilución 1/50
Ordenarlas de más concentrada a más diluida

TRABAJO PRACTICO Nº 1

Extracción y cuantificación de proteínas

Objetivos: * Extraer proteínas de diferentes tejidos: animales y vegetales.
* Cuantificar lasproteínas extraídas por dos métodos colorimétricos diferentes.

Materiales:
-Hígado de ratón normal y de ratón ayunado durante 18 hs.
- Germen de trigo
- Buffer A: Fosfato 20 mM pH 7,5.
- Buffer B Tris-HCl 100 mM pH 7,5
- muselina.
- Minipimer
-Homogenizador Potter-Elvenhjem
- Reactivo de µBiuret: 1,3 g de SO4Cu 5H2O en 100 ml de H2O + 173 gr de citrato trisódico y 100 gNa2CO3 (disolver en agua con calor). Llevar todo a 1litro.
- NaOH 3%
- Reactivo de Bradford 100 mg de Coomasie Brillant Blue G-250 en 50 ml de etanol 95 % (disolver bien). Agregar 100ml de PO4H3 y llevar a 1litro.
- Solución Patrón de seroalbúmina bovina (BSA) 10 mg/ml en H2O.




Primer día: Extracción de proteínas

Preparación de homogenatos
a) germen de trigo
b) hígado...