Guias De Bioquimica

Guías de Laboratorio
BIOQUIMICA

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIRIQUI
DEPARTAMENTO DE QUIMICA

Experimento 1.
Preparación de Soluciones Amortiguadoras

I. Objetivos:
Al finalizar esta práctica el estudiante estará en capacidad de:

1. Preparar experimentalmente diferentes soluciones amortiguadoras.
2. Determinar el pH de las soluciones anteriormente preparadas.
3.Establecer la relación entre el pH y un amortiguador.

II. Marco Teórico:
Solución amortiguadora es aquella que se opone los cambios de pH cuando se agrega ácido o álcali. Tales soluciones se utilizan en muchos experimentos bioquímicos en los cuales se necesita controlar exactamente el pH.

De la ecuación de Henderson-Hasselbalch, se puede deducir que el pH de una solución amortiguadoradepende de dos factores uno es el de pKa y el otro es la proporción de sal a ácido. Esta proporción se considera igual a las cantidades de sal y ácido mezcladas en el intervalo de pH entre 4 y 10, donde la concentración de hidrogeniones e hidroxilos del medio acuoso es muy baja y se puede ignorar.

PH = pKa + log 10 [sal] / [ácido]

Tomemos por ejemplo los amortiguadores deacetato que están compuestos por una mezcla de ácido acético y acetato de sodio:

CH3COOH ↔ CH3COO- + H+
CH3COONa → CH3COO- + Na+

Puesto que el ácido acético está tan solo débilmente disociado, la concentración de ácido será casi la misma que se agregó a la mezcla; en la misma forma la concentración de iones acetatopuede ser considerada como igual a la concentración de acetato de sodio añadido a la mezcla, ya que la sal estará completamente disociada. La máxima capacidad amortiguadora de la solución se cumple cuando la concentración de la sal es igual a la concentración del ácido, en este punto pH = pKa. Si el pKa del ácido acético es 4.8, en la práctica las soluciones amortiguadoras se usan en elintérvalo de pH entre 3.8 y 5.8, es decir 1 unidad alrededor del pKa. Esto se cumple generalmente para todas las soluciones amortiguadoras.

Algunas de las soluciones amortiguadoras que se usan más frecuentemente en el laboratorio se muestran en la Tabla 1. Como se dijo anteriormente, el intervalo útil para la mayoría de los amortiguadores es de una unidad de pH por encima o por debajo del valor depKa.

El amortiguador que se escoja en un momento dado debe seleccionarse con cuidado, ya que los resultados experimentales pueden deberse a efectos específicos de los iones utilizados y no al pH. Algunos amortiguadores que producen reacciones desfavorables son: boratos, citratos, fosfatos y tris.

Tabla 1: Amortiguadores usados en investigaciones biológicas.

Ácido o base | Pka | pKa | pKa|
Ácido fosfórico | 2.1 | 7.2 | 12.3 |
Ácido cítrico | 3.1 | 4.8 | 5.4 |
Ácido carbónico | 6.4 | 10.3 | - |
Glicil glicina | 3.1 | 8.1 | - |
Ácido Acético | 4.8 | - | - |
Tris | 8.3 | - | - |
Hepes | 7.6 | - | - |

III. Materiales y Reactivos.
a) Volumétricos 100 mL, vasos químicos, balanza, potenciómetro, buretas, probetas, papel parafilm, espátulas.
b) Fosfato monobásico depotasio KH2PO4 0.2 M, ácido cítrico, citrato trisódico, Fosfato dibásico de sodio, hidróxido de sodio y HCl.
Hidróxido de sodio NaOH 0.2 M

IV. Procedimiento

1. Amortiguador de Ácido cítrico/ Citrato de sodio 0.05 M

En un frasco volumétrico de 100 mL coloque x mL de Ácido cítrico 0.05 M y complete hasta la marca con Citrato de trisódico 0.05 M.

X mL | 91 | 86 | 80 | 75 | 70 | 65 |60 | 55 | 50 | 44 | 39 |
pH | 3.0 | 3.2 | 3.4 | 3.6 | 3.8 | 4.0 | 4.2 | 4.4 | 4.6 | 4.8 | 5.0 |
X mL | 34 | 29 | 24 | 19 | 14 | | | | | | |
PH | 5.2 | 5.4 | 5.6 | 5.8 | 6.0 | | | | | | |

2. Amortiguador de Fosfato dibásico de sodio 0.2 M Na2HPO4
En un frasco volumétrico de 100 mL coloque x mL de Ácido clorhídrico 0.2 M a 50 mL de Fosfato dibásico de sodio y afore con agua...