Guía De Laboratorio

Universidad de Nariño Facultad de Ciencias Agrícolas Programa: ingeniería Agroforestal _______________________________________________________________

BIOLOGIA MOLECULAR PRACTICA DE LABORATORIONo. 1 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL
Anjuly Tatiana Morillo P. I Af.
OBJETIVOS Adquirir el conocimiento teórico y práctico, para obtener ADN vegetal. Extraer ADN de lulo solanum spp con la aplicación dela metodología Dellaporta (1983) modificado.

FUNDAMENTOS El aislamiento de ADN celular, es de gran importancia ya que representa una etapa preliminar definida para todos los estudios de biologíamolecular (Upegui, 1998). Existen gran variedad de métodos de extracción de ADN, los cuales se emplean de acuerdo a la disponibilidad y facilidad de reactivos y equipos, a la especie a evaluar, alestado de desarrollo, entre otras. En la extracción de ADN, existen etapas básicas que se trabajan de manera general en la mayoría de protocolos, las cuales se describen a continuación. Es importante teneren cuenta, que el punto de partida que define el éxito de una extracción de ADN, es la obtención de un buen tejido vegetal, es decir, que éste sea fresco, sano, y en algunas especies preferiblementejoven, la obtención de ADN de buena calidad puede dificultarse por presencia de gran cantidad de proteínas, polisacáridos, taninos, pigmentos, fenoles, que forman complejos difíciles de separar. Unavez se cuenta con el tejido en buenas condiciones, se debe romper las membranas de las células y del núcleo, esto se logra a través de la maceración mecánica y haciendo uso de una solución tampón quecontenga una concentración muy alta de iones. Al romper las membranas se logra liberar el contenido de las células, por lo cual se obtiene una solución con núcleos, orgánulos, proteínas, ADN, ARN, sinembargo, el uso de un detergente en la solución tampón, permite romper núcleos sin que se afecte el ADN, además de eliminar las proteínas que se encuentran protegiéndolo. Después del rompimiento de...