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4. METODOLOGÍA

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Metodología

4.1. CEPAS BACTERIANAS ESTUDIADAS

4.1.1. Muestras de origen antártico
Las muestras a partir de las cuales se obtuvieron los aislamientos bacterianos
estudiados en la presente Memoria Doctoral proceden de tres zonas de la Antártida:
Johnson’s Dock y Chlorite Bay en la isla de Livingston, donde se encuentra la Base
Antártica Española “JuanCarlos I”, y Admiralty Bay situada en la isla del Rey Jorge.
Concretamente las islas de Livingston y del Rey Jorge son las de mayor superficie
dentro del conjunto de las Shetland del Sur.

Un primer grupo de muestras proceden de Jonhson’s Dock e Inlet Admiralty Bay y
fueron tomadas durante el verano austral de 1987-1988. Concretamente las de cala
Jonhson proceden de sedimentos del fondo, ademásdel producto resultante del
filtrado de 25 litros de agua a través de diversos filtros de 0.22 µm de poro. Las
muestras se guardaron en recipientes estériles sin adición de ningún tipo de medio de
cultivo. La muestra procedente de Inlet Admiralty Bay corresponde a un lodo glaciar
recogido en una zona donde el hielo y la tierra se mezclan, de ahí su aspecto de lodo.
La muestra fue extraída delhielo de forma aséptica e introducida en un recipiente
adecuado para su transporte.

Un segundo grupo de muestras, concretamente de aguas, fue tomado durante el
verano austral de 1988-1989, en una zona de deshielo de un glaciar en Jonhson’s
Dock.

El último grupo de muestras procede de sedimentos de Chlorite Bay, en la Península
de Byers, y fueron recogidas durante el verano austral de1990-1991. Al igual que en
los casos anteriores las muestras fueron introducidas asépticamente en recipientes
estériles sin medio de cultivo.

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Estudio taxonómico polifásico de bacterias procedentes de ambientes antárticos: descripción de cuatro nuevas especies.

4.1.2. Aislamiento de los biotipos bacterianos estudiados
Para el aislamiento de los microorganismos se utilizaron lossiguientes medios de
cultivo sólidos:

1. TSA, Triptona Soja Agar
2. TSA con Agua de Mar Artificial
3. Sabouraud glucosado Agar
4. Medio de Goodfellow:
Peptona de caseína
Extracto de levadura
FePO4
Agua de Mar Artificial
Agar

5
1
0.01
42
15 g/L
pH 7.2

En el caso del primer grupo de muestras (verano austral 1987-1988) se procedió a la
dilución de alícuotas en tubos de Ringer 1/4 con1, 2 y 3 mL de la solución. A partir de
las diluciones y tras su correcta homogenización se procedió a la siembra en los
medios de cultivo.

El segundo y el tercer grupo de muestras, correspondientes a las campañas del
verano

austral

1988-1989

y

1990-1991

respectivamente,

fueron sembrados

directamente en los distintos medios de cultivo.

Tras una primera incubación a11 ºC durante un período de 6 d se procedió a la
selección de las colonias aparecidas en función de su morfología y la respuesta a la
tinción de Gram. Los biotipos seleccionados se sometieron a sucesivas resiembras
sobre TSA y TSA con agua de mar artificial para asegurar la obtención de cultivos
puros. Las condiciones iniciales de incubación durante las resiembras fueron siempre
de 6 d a 11ºC. A los tres días las colonias ya estaban bien formadas pero aquellas
que eran pigmentadas no daban su coloración característica hasta los 6 días.

La denominación de cada una de las cepas aisladas, así como las muestras a partir de
las cuales proceden y los lugares de toma de las muestras, se señalan en la tabla 4.1.
que se muestra a continuación.

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Metodología

Tabla 4.1. Relaciónde aislamientos obtenidos, muestras de las que proceden y
lugares de origen de las muestras.
CEPA

MUESTRA

ORIGEN MUESTRA

NF1

Lodo glaciar

Inlet Admiralty Bay

NF7

Lodo glaciar

Inlet Admiralty Bay

NF8

Lodo glaciar

Inlet Admiralty Bay

NF11

Lodo glaciar

Inlet Admiralty Bay

NF12

Lodo glaciar

Inlet Admiralty Bay

NF18

Filtrado de 25 L de agua...