hexosaminidasa

Determinación de la actividad enzimática de la
hexosaminidasa en fluidos biológicos
Marlén Rodríguez ', Angela Sánchez ', Mónica A. Gutiérrez 2, Antonio J. Bermúdez

Resumen
Este estudio describe un método electroforético que emplea el sustrato fluorogénico 4metilumbelliferil 2-acetamida 2-deoxi-O-D-glucopiranosido, para la determinación
enzimática de la hexosaminidasa (HEX) en linfocitosde sangre periférica, líquido
amniótico, suero y orina. Se propone que la electroforésis sirva como método
confirmatorio del diagnóstico de la gangliosidosis GM2, ya que permite determinar la
actividad enzimática de la HEX y hacer la diferenciación de las isoenzimas (HEX A y
HEX 8). La deficiencia de estas isoenzimas se detecta por disminución o ausencia de
fluorescencia.
Summary
This studydescribes a method, that uses electrophoresis for the enzyme hexosaminidase (HEX), the substrate 4-metil-umbelliferyl 2-acetamide 2-deoxi-beta-Dglucopiranoside. We used samples from serum, urine and amniotic fluid, frorn normal
people. We propose this method could be used as diagnostic for gangliosidoses GM2,
because of the sensibility for the detection of isoenzymes HEX A and HEX B, and thecapability to detect differences in fluorescence.
La hexosaminidasa (HEX) pertenece a la familia
de las hidrolasas: esta enzima está rese ente en
los lisosomas de todas las células nucleadas
del organismo (1, 2).
La degradación lisosomal de la p-Nacetilgalactosamina terminal del gangliósido
GM2 requiere tres polipéptidos genéticamente
distintos; las subunidades & y p de la HEX A y laproteina activadora GM2. Un defecto en alguno
de los tres genes puede deteriorar el
catabolismo del gangliósido (2-8).
Se presentan tres tipos de gangliosidosis GM2:
a. Enfermedad de Tay-Sachs o variante B;
causada por una mutación en el cromosoma
15, en el locus que codifica para la subunidad
a de la HEX A. Los individuos con esta

'

enfermedad poseen actividad de HEX A
deficiente. oero. laHEX B es normal (2. 3. 9).
~,,
,
~. . ,
~

~

b, En la
de Sandhofi o variante O,
se presenta una mutación en el gen
(cromosoma 5) que codifica para la
subunidad P Estos pacientes tiene deficien-te
actividad de HEX A y B (2, 3, 9).
.
.
c. La variante AB de la gangli~sidosis GM2
resulta de un defecto en el cromosorna 5, en
el gen que codifica para la proteina
activadora. Estos~acientes
tienen activa la
HEX A y HEX B, pero, el catabolismo de
GM2 es deficiente (2, 3, 9).

Hasta el momento, se han encontrado más de
cuarenta mutaciones alélicas diferentes en el locus de la subunidad a como responsables de

Universidad de los Andes, Santa Fe de Bogotá.
Laboratorio de Genética, Instituto Nacional de Salud, Santa Fe de Bogotá.

RODRIGUEZ M.. SANCHEZ A,. GUTIERREZM.A.,BERMU0EZA.J.

enfermedades clínicamente diferentes. Todas
están caracterizadas por disminución o ausencia de actividad de la HEX A (10-14).
Para la determinación de HEX, se han descrito
técnicas electroforéticas que emplean el sustrato sintético 4-metilumbelliferil 2-acetamida 2
deoxi p-D-glucopiranósido. Al hidrolizarse este
sustrato, se libera N-acetilglucosamina, formandose4-metilumbelliferona (fluorescente). Las
bandas se visualizan a 366 nm (2,8, 15).
En el presente estudio, se establecieron las
condiciones óptimas para determinar la actividad
enzimática de la HEX en diferentes fluidos
biológicos de individuos normales.
Materiales y métodos
Se seleccionó una población de 15 individuos
normales, de diferente edad, de ambos sexos y
sin antecedentes personales nifamiliares de
patologías genéticas. Se tomaron 10 mL de
sangre periférica heparinizada. Se recogieron 10
mL de la primera orina de la mañana, chorro
medio. La obtención del Iíquido amniótico
(aproximadamente, 20 a 40 mL) fue mediante
amniocentesis asistida por ecografía y enviada

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Obtención y procesamiento de leucocitos...