Hexosas

Escuela de Bioquímica

Profesor patrocinante:
Dr. Alejandro Reyes P.
Instituto de Bioquímica
Facultad de Ciencias

INTERACCIÓN DE LAS METILXANTINAS CON EL
TRANSPORTADOR DE HEXOSAS GLUT1

Tesis de grado presentada como parte
de los requisitos para optar al grado de
Licenciado en Bioquímica y al Título
Profesional de Bioquímico.

PAOLA GABRIELA OJEDA OJEDA
VALDIVIA-CHILE
2005

AGRADECIMIENTOS

Ami profesor patrocinante, el Dr. Alejandro Reyes P. por haberme acogido en su
laboratorio, por todo el tiempo, dedicación y conocimientos que me brindo durante el desarrollo
de esta tesis, además de su estímulo, comprensión y apoyo en esta etapa de mi vida.
Quiero agradecer a la Dra. Ilona Concha y al Dr. Juan Guillermo Cárcamo, por acceder a
formar parte de mi comisión evaluadora y por el interésmanifestado en cada momento durante el
transcurso de esta tesis.
Así también quiero agradecer a mis compañeros de laboratorio, en especial a Ximena
Valenzuela, por su paciencia, apoyo y tolerancia.
El presente trabajo se llevó a cabo en El Laboratorio de Proteínas de Membranas del
Instituto de Bioquímica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile, y contó con el
financiamiento delproyecto FONDECYT 1020908.

....Dedico esta tesis a mis padres, por el apoyo y cariño
que me han entregado a lo largo de mi vida. A mis
hermanos por acompañarme siempre. A Claudio por su
amor incondicional. Y a mi pequeña Marión por la
sonrisa que me regala cada mañana....

i

ÍNDICE DE CONTENIDOS

1. RESUMEN………………………………………………………………………………………1
1.1 SUMMARY……………………………………………………………………………………2
2. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………………………...3
3. MATERIALES Y MÉTODOS.................................................................................................. 14
3.1 Materiales ....................................................................................................................... 14
3.2 Aislamiento de los eritrocitos......................................................................................... 14
3.3 Preparación de membranas de eritrocitos humanos ....................................................... 15
3.4 Procedimiento experimental para ensayos trans-cero de entrada para glucosa.............. 16
3.4.1 Cinética de incorporación de glucosa................................................................. 16
3.4.2 Curva de saturación para el transporte de glucosa............................................. 17
3.4.3 Inhibición del transporte por metilxantinas ........................................................ 17
3.4.4 Determinación de la inhibición en ensayos trans-cero de entrada...................... 18
3.5 Procedimiento experimental para ensayos de intercambio en equilibrio. ...................... 18
3.6 Procedimiento experimental para ensayostrans-cero de salida para glucosa ................ 19
3.6.1 Cinética de salida de análogos de glucosa.......................................................... 20
3.6.2 Curva de saturación. ........................................................................................... 20
3.6.3 Inhibición del transporte por metilxantinas....................................................... 21
3.6.4Determinación de la inhibición........................................................................... 21
3.7 Ensayos de salida de D-glucosa (Ensayo de Sen y Widdas) .......................................... 22
3.7.1 Inhibición de la salida de D-glucosa por metilxantinas.................................... 22
3.7.2 Caracterización del tipo deinhibición............................................................... 23

ii

3.8 Ensayos de unión desplazable por D- glucosa de citocalasina B en membranas de
eritrocitos .............................................................................................................................. 23
3.8.1 Efecto de las metilxantinas ......................................................................................... 23
3.9 Lavado y...