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Se emplean cultivos en monocapa, primarios o de línea, susceptibles al virus que se desea aislar (ver cuadro 1) con más de un 75% de la superficie cubierta yen envases adecuados. Para este propósito se emplean tubos de Leighton o de ensayo comunes con laminillas de vidrio en su interior ó placas de 24 wells(LABTEK*). Estos cultivos deben estar libres de virus y anticuerpos que interfieran con los virus que se desea investigar. Por ejemplo, es frecuente que los cultivosprimarios o de línea puedan estar infectados con cepas no citopatogénicas de BVDV o el suero bovino que se usa en el medio de crecimiento pueda teneranticuerpos y/o virus.

Seleccionados los cultivos, se procede a :

Inoculacion de la muestra (1° pasaje) , utilizando no menos de 3 tubos o wells pormuestra de material, descartando el medio de crecimiento, se inoculan con 0,2 ml de suspensión problema por tubo o 0,1 ml por cada orificio de placa x 24w. Enestas condiciones se incuban a 37ºC durante 45-60 minutos para facilitar la adsorción del virus. Cumplimentado este período se debe volcar el inóculo yrealizar 2 lavados con medio de mantenimiento, particularmente en el caso de materiales muy tóxicos para la células como sangre, MF, semen, bazo, hígado, etc. Luegose incorpora 1,8 - 2 ml de medio de mantenimiento celular por tubo o 1ml por cada orificio de la placa y se incuba a 37ºC. Se observan diariamente almicroscopio durante 7 días para la detección de ECP. Si no se detecta presencia viral al microscopio, se debe realizar un nuevo pasaje en cultivo celular (pasaje ciego).