hibridacion

Hibridación in situ es una técnica que detecta secuencias de ácidos nucleicos en células, cromosomas o tejidos preservados.
La detección in situ provee una visualización directa de la localizaciónespacial de secuencias específicas que es crucial para dilucidar la organización y función génica, por lo que el método de hibridación in situ se ha convertido en una técnica importante en diversoscampos, incluyendo diagnóstico de rearreglos cromosomales, detección de infecciones virales y análisis de la función génica durante el desarrollo embrionario.
La hibridación in situ toma comofundamento la complementaridad de los ácidos nucléicos, la cual puede ser DNA y/o RNA, a través de puentes de hidrógeno formados entre las bases: adenina–timina (DNA) o uracilo (RNA) y citosina-guanina (DNA yRNA). Este apareamiento da lugar a una doble cadena en la cual una cadena, tiene la orientación opuesta a la otra con respecto al esqueleto azúcar-fosfato. La secuencia es leída de 5' a 3'.

III.Pasos y consideraciones para la hibridación in situ.
La técnica involucra:
a)  Generación de ácidos nucleicos marcados para una detección
subsecuente.
b)  Fijación de tejidos (seccionados),preparación de cromosomas.
c)  Preparación del tejido para incrementar el acceso del ácido nucleico
marcado.
d)  Hibridación de la sonda marcada en cromosomas o tejidos.
e)  Lavados selectivosque remuevan las sondas que no hibridan.
f) Detección de la sonda marcada, revelando la localización celular de los ácidos nucleicos.




Este método puede ser combinado con PCR para amplificarlas secuencias de pegado y aumentar la detección de la señal. Un aspecto crítico en éste método es que los ácidos nucleicos que están retenidos in situ no deben de ser degradados por nucleasas, paraque sea posible la hibridación de la sonda.
Actualmente existen varias alternativas para elegir el tipo de sonda y los métodos de marcaje y detección.

Las alternativas mayormente usadas son:...