Hibridacion

Hibridación
* Consiste en la unión complementaria de ácidos nucleicos (AN)
* Técnica utilizada para detectar moléculas diana a partir de una sonda complementaria
* Se utiliza sobre todopara diagnóstico de enfermedades
* La unión entre sonda y diana depende de la complementariedad de bases
* Se puede tener uniones “relajadas” o uniones muy específicas.
* La unión entresonda y diana es evidenciada ya que la sonda está marcada
* Extracción de ácidos nucléicos
* Procesar muestra con proteasas para extraer ácidos nucleicos (AND o ARN)
* El AN seprecipita con etanol y se utiliza en PCR
* Para algunos organismos, existen protocolos muy simples de extracción de AN (citomegalovirus y herpes por ejemplo)
* La sonda se inserta en vectoresvirales o en plásmidos para su “clonación”
* Se extraen las réplicas del gen deseado
* Se pueden utilizar también oligonucleotidos sintéticos o PCR
* Las sondas son marcadas con isótoposradioactivos o con marcadores no radioactivos (proteínas)
* La sonda y la diana son incubadas ya sea en líquidos o en nitrocelulosa y después se busca la presencia de los marcadores
* Las técnicasde hibridación pueden tener una baja sensibilidad debido a que en algunos casos existe una sola copia de la secuencia en blanco. Por esta razón las técnicas de amplificación, que pueden producirmillones de copias de un determinado segmento de ADN o ARN, han tenido un impacto extraordinario en muchas áreas del diagnóstico clínico.
* Amplificación
* Técnica de biología molecular cuyoobjetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.
* Consiste enrealizar millones de copias (amplificar) de una región específica de ADN
* algunas de las técnicas de amplificación más usadas en la actualidad, tanto elaboradas en el propio laboratorio como...