Hidrólisis y Reacciones De Proteínas

Objetivos generales:
* Efectuar la hidrólisis total de una proteína.
* Identificar algunos aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteína por medio de sus propiedades fisicoquímicas y por cromatografía en placa fina.

Procedimiento experimental:
Primero antes de realizar las reacciones para identificar proteínas hidrolizadas realizamos la preparación de cuatro soluciones queusaremos a lo largo de la práctica, que son las siguientes:

Hidrólisis de grenetina (Solución A):
Para esta solución, agregamos 1 g de grenetina, 10 mL de agua destilada y 10 mL de ácido clorhídrico concentrado en un matraz balón de fondo plano, teniendo cuidado a la hora de adicionar el acido, ya que es muy corrosivo. Después, adaptamos un refrigerante en posición de reflujo y calentamos la mezcladel matraz por 35 minutos exactos; en este paso ocurrió la hidrólisis de la grenetina para generar α-aminoácidos derivados de esta proteína. Dejamos enfriar y el profesor adicionó un poco de carbón activado para eliminar ciertas impurezas coloridas que pudiera contener el producto y se calentó 2 minutos. Por último filtramos para separar el carbón activado y tenemos la solución con aminoácidosen un vaso de precipitados.

Solución de grenetina sin hidrolizar (Solución B):
Se tomaron 5 mL de la solución A y se adicionó hidróxido de sodio al 10% hasta neutralizarlo. Se tenía un estimado era de 10 a 12 mL de la base, sin embargo nos pasamos al adicionar el hidróxido de sodio y el papel pH se tornó verde amarillento, cuando debía quedar amarillo que indica un pH de 7 (neutro). Optamos porusar solución B de otros compañeros como la profesora propuso. Esta solución B fue utilizada en tres reacciones que escribimos más adelante.

Solución de grenetina sin hidrolizar (Solución C):
Esta solución simplemente consta de una mezcla entre 0.5 g de grenetina y 20 mL de agua destilada en un vaso de precipitados. En esta solución no hay aminoácidos hidrolizados.

Solución de albúmina(Solución D):
Primero preparamos una solución de albúmina, agitando una clara de huevo por 10 segundos con el agitador y agregamos 100 mL de agua; volvemos a agitar y filtramos la mezcla en una gasa, el filtrado resultante es la solución con albúmina.

Después de la preparación de las soluciones, procedimos a realizar por mesa las reacciones de identificación:

1) Reacción xantoproteica:Esta prueba básicamente pone en manifiesto los aminoácidos portadores de grupos aromáticos. Primero se forma el Ion Nitronio, dos moléculas de ácido nítrico reaccionaran entre ellas y un par de electrones libres del oxigeno tomarán un hidrógeno de otra molécula de ácido nítrico, formándose el ión nitronio y agua.
En ese momento adquiere 2 cargas positivas por lo cual un par de electrones libresdel oxigeno los cede para formar un doble enlace. El mecanismo de reacción es el siguiente:

Una vez realizado esto, ocurre una nitración. Tenemos el aminoácido con sustituyente aromático, este reaccionara con el ión nitronio que se acaba de formar.
Uno de los dobles enlaces de un carbono cede uno de sus enlaces para que se pueda unir el ión nitronio, pero este pierde su aromaticidad y lamolécula es muy inestable, por lo cual, el hidrogeno que tiene ese mismo carbono cederá sus electrones para que se recupere la aromaticidad y se forme la molécula más estable.

La siguiente tabla muestra los resultados obtenidos:

Sustrato | Observación: |
Solución “A” | Coloración amarilla |
Solución “D” | Coloración amarilla |

La coloración amarilla se debe a la nitración del anilloaromático, con esto se puede concluir que la solución “A” y “D” son portadores de anillos aromáticos.

2) Reacción de precipitación:
En esta prueba se pone en manifiesto los enlaces disulfuro. El mecanismo de reacción es el siguiente:

Al agregar el acetato de plomo a ambas soluciones y calentar a ebullición con agitación se logró observar que en la solución “A” precipito solamente el...