hidrolisis de una proteina y ensayos para proteinas y aminoacidos

OBJETIVOS:
Efectuar la hidrolisis total de una proteína
Identificar algunos aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteína, por medio de sus propiedades físico-químicas.
Identificar por cromatografía en placa fina algunos de los aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteína.

RESULTADOS:
Reacciones de identificación
Experimento 1: Reacción Xaponoproteica
SustratoObservaciones
Sol. A
Muy positivo +++++
Un color amarillo predominante
Sol. D
Positivo ++
Un color amarillo tenue.

Experimento 2: Reacción de Precipitación
Sustrato
Observaciones
Sol. A
Se tornó de un color muy obscuro (presencia de enlaces azufre)
Sol. D
Se tornó a un color blanco caseoso



Experimento 3: Reacción de Biuret
Tubo
Contenido
Positivo/negativo
Observaciones
1
Agua+ hidróxido de sodio
negativo
Se mantuvo un color transparente
2
Sol. C + hidróxido de sodio
Positivo +++
Se observó una coloración azul-violeta
3
Sol. A + hidróxido de sodio
Negativo
Se mantuvo un color transparente
4
Sol D
Positivo +
Se observó una coloración azul-violeta
5
Sol D+ hidróxido de sodio
Positivo +++++
Se observó una coloración violeta
6
Sol A
Negativo
Semantuvo un color transparente

Experimento 4: Reacción con Ninhidrina
Contenido
Resultado de coloración
Observaciones
Sol. B
+ + + +
Color muy purpura
Sol. Patrón
+ + +
Coloración morada
Sol. D
+ ++
Coloración azul-violeta
Sol. C
+
Coloración blanca caseosa
Agua
- - -
Transparente

Experimento 5: Reacción con Acido Nitroso
Contenido de tubo
Resultado de coloraciónObservaciones
Sol. A
+ + + + +
Gran desprendimiento de burbujas
Testigo
- - -
Se mantiene igual
Sol. C
+ +
Hay desprendimiento de burbujas en menor proporción
Sol. B
+
Casi no hay desprendimiento de burbujas.

Acción reguladora de aminoácidos
Solución
Indicador
Color inicial
mL HCl 0.1 N
Color final
Agua Destilada
Rojo Congo
Amarillo
5
Rosa
Solución B
Rojo CongoNaranja
8
Rosa

mL NaOH 0.1 N

Agua Destilada
Fenolftaleína 0.1%
Incoloro
1
Rosa
Solución B
Fenolftaleína 0.1%
Incoloro
4
Rosa
Observaciones
Rojo Congo= Se observa una coloración inicial amarillo en la solución B y naranja en el agua destilada.
Fenolftaleína= Se observa una coloración inicial café en la solución B y lechosa en el agua destilada.



Experimento 6: Cromatografíaen placa fina
Contenido
Relación de frentes Rf
Solución B
0.50
Aminoácido Patrón
Vallina
0.27
Aminoácido Patrón
Glicina
0.51
Aminoácido Patrón
Fenilalanina
0.71


Análisis de resultados:
Experimento
Utilidad del experimento
Interpretación de resultados
1
Demostrar anillos aromáticos.
Debido a que ambos tubos mostraron una coloración positiva, ambos poseen añillos aromáticosen su molécula, la decoloración mayor en la grenetina se debe a la mayor presencia de este grupo.
2
Demostrar enlaces disulfuro.
Se comprueba que solo la albumina contiene enlaces disulfuro (R-S-S-R).
3
Demostrar enlaces peptídicos.
En los tubos 6 y 3 no hubo reacción lo cual demuestra una hidrolisis total pues esta reacción se puede llevar a cabo por los enlaces peptídicos; en los tubos 4 y5 encontramos albumina y ambos presentan coloración (reacción positiva) y por tanto concluimos que la albumina tiene enlaces peptídicos en su molécula; en el tubo 2 encontramos grenetina sin hidrolizar y como se esperaba la reacción fue positiva; el único resultado inesperado fue en el tubo 1, ya que este contenía solo agua y por tato se esperaba un resultado de reacción negativa, pero se obtuvoreacción positiva en todos los equipos que ocuparon como muestra agua del laboratorio.
4
Demostrar grupos amino.
En todos los tubos excepto en el que contenía agua hubo una coloración esto nos comprueba que todas las soluciones contienen grupos amino, la intensidad de esta solo nos da una idea de la proporción en la que se encuentran estos grupos amino.
5
Demostrar la presencia de grupos...