hidrolisis de una proteina

Instituto Politécnico Nacional.
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas.

PRACTICA 11
HIDROLISIS DE UNA PROTEINA Y ENSAYOS PARA PROTEINAS Y AMINOACIDOS



Objetivos

1. Efectuar la hidrolisis total de una proteína
2. Identificar algunos aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteína, por medio de sus propiedades físico-químicas.
3. Identificar por cromatografía enplaca fina algunos de los aminoácidos presentes en un hidrolizado de proteína.

Resultados
Reacciones de identificación
Reacción xantoproteica
Solución de hidrolisis de grenetina (¨A¨)
Solución de albumina (¨D¨)
Positiva
Positiva
Se observó un amarillo muy claro
Se observó un color amarillo en forma de burbujeo


Reacción de precipitación
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Solución de hidrolisis de grenetina(¨A¨)
Solución de albumina (¨D¨)
Agua destilada
Negativa
Positiva
negativa
Color transparente
Color café fuerte
Color transparente



Reacción de Biuret











Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Agua destilada más NaOH
Solución de grenetina sin hidrolizar más NaOH
Solución de albumina sin hidróxido de sodio
Solución de hidrolisis de grenetina más NaOH
Solución de albumina más NaOHSolución de hidrolisis de grenetina sin hidróxido de sodio
Al agregarle la solución de sulfato de cobre (color azul claro)
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
Se observó un color azul
Al agitar se observaba un color violeta claro
Se observó un color azul cielo
Se observó un color azul
Se observó un color violeta con azul
Se mantuvo transparente



Reacción de ninhidrinaReacción con ácido nitroso




Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Solución de hidrolisis de grenetina (¨A¨)
Solución de grenetina sin hidrolizar (¨C¨)
Solución de albumina (¨D¨)
Tubo sin proteína
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
No se observó ningún burbujeo
Solo se escuchó el burbujeo mas no se observo
Se observó un burbujeo bastante voluminoso
Se observó un burbujeo muy rápido



Acción reguladorade aminoácidos

Rojo congo
Fenolftaleína
Hidrolisis de grenetina (neutralizada) (¨B¨) más HCl
Agua destilada más HCl
Hidrolisis de grenetina (neutralizada) (¨B¨) más NaOH
Agua destilada más NaOH
Se agregaron 4 gotas de HCl obteniendo un color azul
Se agregaron 2 gotas de HCl obteniendo un color azul
No se pudo realizar este experimento puesto que ya no había solución ¨B¨
Se agregó 1 gota deNaOH y se obtuvo un color fucsia








Análisis de resultados

Reacción Xantoproteíca:

En esta reacción da positiva a proteínas que contengan aminoácidos con grupos aromáticos especialmente en presencia de tirosina y triptófano, si obtenemos un color amarillo pálido nos indica la presencia de un anillo aromático nitrado por la sustitución electrofílica aromática
Al alcalinizar la solución conNH4OH o NaOH esta se tornara de color naranja.

La grenetina contiene tirosina, la clara de huevo contiene tanto tirosina como triptófano, por lo que podemos deducir que nuestras pruebas experimentales fueron satisfactorias ya que en ambas pruebas nos tenía que dar positiva lo cual fue así.

Reacción de precipitación

Esta reacción se basa en la separación del azufre de los aminoácidos mediante unálcali, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.
Esta prueba dará positivo a proteínas que contengan puentes de disulfuro en las cuales se formara un precipitado de color negro o café obscuro.

Uno de los aminoácidos de la clara de huevo es la cistina, la cual contiene puentes de disulfuro, en esta prueba obtuvimos un color café bastante fuerte, porlo que podemos decir que fue positiva, mientras que en el agua destilada y la solución de hidrolisis de grenetina fue negativo ya que no contienen puentes de disulfuro por lo que obtuvimos un color transparente.

Reacción de Biuret

El reactivo de Biuret está formado por una disolución de sulfato de cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la...