Hidrolisis Enzimatica De Un Polisacarido

CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II

PRÁCTICA 1

HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE UN POLOSACÁRIDO VEGETAL (ALMIDÓN)



INTRODUCCIÓN
Los polisacáridos son polímeros que contienen tres o más unidades de monosacáridos. Se utilizan como un medio de almacenar energía y como parte de los tejidos estructurales del organismo. El almidón es un homopolisacárido formado pormoléculas de glucosa que utilizan los vegetales. El almidón se encuentra en forma de gránulos en sus hojas (se acumula en los cloroplastos donde es un producto directo de la fotosíntesis), raíces y semillas. Estos gránulos son insolubles en agua.
En los vegetales, el almidón se encuentra en uno o más granos amiláceos en un plásmido. La cantidad de almidón en diversos tejidos depende de muchosfactores genéticos y ambientales. El almidón se acumula a la luz del día cuando la fotosíntesis excede las tasas combinadas de respiración y translocación, después parte de él desaparece por la noche.
Los almidones naturales son una mezcla de dos tipos de polisacáridos: la amilosa y la amilopectina. La amilosa es una cadena lineal (cuyo peso molecular es de unos 50000) cuyas unidades de glucosaestán unidas por enlaces glucosídicos α (1-4) teniendo una conformación helicoidal espiralizada. La amilopectina (cuyo peso molecular es alrededor de 300 000) es una estructura de cadena ramificada resultante de la presencia de un pequeño número de enlaces α (1-6) que tiene lugar cada 20 a 24 unidades de glucosa en diversos puntos a lo largo de una cadena que consta de enlaces α (1-4).
Lafunción biológica del almidón es almacenar alimento en las plantas. Cuando se necesita una fuente de carbono y energía, se libera almidón de los gránulos y las enzimas lo degradan. Casi todos los vegetales contienen dos enzimas hidrolíticas diferentes, conocidas como α- amilasa y β-amilasa. Ambas atacan la fracción de amilosa y amilopectina en los enlaces α (1-4), pero en una forma diferente.El rompimiento de la α -amilasa ataca de manera aleatoria enlaces 1,4 en las moléculas de amilosa y amilopectina, al principio creando huecos al azar en los granos de almidón y liberando una mezcla de glucosa y maltosa. Sin embargo, la α-amilasa no puede atacar los enlaces 1,6 localizados en los puntos de ramificación de la amilopectina, por lo que la digestión de amilopectina cesa cuando aúnquedan dextrinas ramificadas con cadenas de longitud corta. Muchas α-amilasas son activadas por Ca+, lo cual es una de las razones por las que el calcio es un elemento esencial.
La acción de la β-amilasa es más ordenada; se caracteriza por la eliminación exclusiva y sucesiva de unidades de maltosa, comenzando por un extremo no reductor. Ninguna de las enzimas puede hidrolizar los enlaces α (1-6),pero la acción combinada de las dos degrada por completo la amilosa a glucosa y maltosa, la amilopectina solo se degrada de manera parcial. Sin embargo existen otros catalizadores en la célula llamados enzimas desramificadoras que hidrolizan específicamente el enlace α (1-6).

OBJETIVO GENERAL
Comprobar la actividad enzimática de las amilasas producidas por semillas de maíz al hidrolizaralmidón y dando como producto final unidades de maltosa.
OBJETIVOS PARTICULARES
Obtener semillas de maíz germinadas a 5, 3 y 0 días.
Extraer las enzimas de las semillas germinadas.
Realizar la curva patrón con maltosa.
Determinar la actividad de la enzima al hidrolizar almidón.
Determinar la cantidad de reductores totales producidos de la hidrólisis enzimática.

MATERIAL Y EQUIPO
1Mortero con pistilo
1 Bisturí
6 Tubos de centrifuga de 15 ml
1 Parrilla de calentamiento
2 Vaso de precipitados de 1 L (para Baño María de 25°C y 100°C)
1 Termómetro
{1 Embudo de filtración de 5 cm de diámetro
3 Pipetas Pasteur con perilla de hule
2 Pipetas de 1mL
1Pipeta de 5mL
1Pipeta de 10 mL
25 Tubos de ensayo
1 Gradilla
1 Espectrofotómetro
1 Centrifuga clínica
1 Par de...