Higiene Y Seguridad En La Hosteleria
PRACTICA No. 1
Tinción de Gram de Exudado Faríngeo
La tinción de Gram es un tipo de tinción empleado en microbiología para la visualización de las bacterias, debe su nombre albacteriólogo danés Christian Gram que desarrolló un método de tinción en 1884.
La tinción de Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaños, morfologías celulares yreacción Gram (color).
Cuando las bacterias retienen la combinación cristal violeta-yodo y se tiñen de violeta, son bacterias Gram Positivas [G (+)], las bacterias que se tiñen de rojo por la safranina sonGram Negativas [G (-)].
Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano y gran cantidad de ácidos teicóicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o acetona,reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada (portratamientos antibióticos, edad celular…).
Las bacterias gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Estamembrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contracolorante.
Metodología
1.Tomar muestra de la parte posterior de la garganta con un hisopo o aplicador de algodón estéril cerca de las amígdalas.
2. Colocar la muestra en un portaobjetos y fijar al calor.
3. Cubrir elfrotis con cristal violeta durante 1 min.
4. Lavar al chorro de agua.
5. Cubrir con lugol durante 1.5-2.0 min.
6. Lavar con agua.
7. Decolorar con alcohol-cetona de 10-30”.
8.Lavar abundantemente.
9. Cubrir con safranina durante 1 min.
10. Lavar y secar.
11. Observar al microscopio con el objetivo 100X
12. Hacer esquemas de lo observado en el frotis teñido...
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