hist

e-HISTOLOGÍA

Técnicas histológicas

• ANAE
Las esterasas son un grupo de enzimas que hidrolizan esteres de ácidos carboxílicos, localizándose fundamentalmente en los lisosomas. Hay muchos tipos de esterasas distintas que actúan sobre diversos sustratos, pero cuyas actividades se solapan, ya que muchas de ellas son capaces de hidrolizar el mismo sustrato. Por ello, la subdivisión delas esterasas se basa en el tipo particular de ester que hidrolizan más eficientemente y en el efecto de diversos inhibidores enzimáticos.
La técnica utilizada en este caso revela todos los tipos de actividad esterasa ya que se emplea como sustrato un ester simple, el alpha-naftil acetato, por ello se denomina esterasa no específica. Los enzimas liberan el alpha-naftol que se revela con la saldiazoica pararrosanilina con nitrito sódico. Como en la mayor parte de las técnicas histoenzimáticas, se emplean tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato, ya que el proceso de deshidratación e inclusión inactivaría los enzimas cuya presencia se quiere demostrar.
RESULTADOS: los puntos con actividad esterasa aparecen de color marrón rojizo.
Imagen: ganglio linfático de rata.________________________________________

• AZUL DE TOLUIDINA
Colorante que tiñe estructura basófilas, tales como la cromatina. Se puede comportar como colorante ortocromático (tiñe de color azul) o metacromático (tiñe de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de la naturaleza química de la sustancia teñida.
Como colorante ortocromático, se usa frecuentemente para teñir tejido nervioso,donde tiñe la heterocromatina y los gránulos de Nissl (acúmulos de cisternas de retículo endoplásmico rugoso de los somas neuronales, así como las fibras nerviosas amielínicas y células de glía. También se utiliza para la tinción de cortes semifinos.
El azul de toluidina tiñe metacromáticamente las estructuras ricas en proteoglucanos sulfatados, como el heparán sulfato, presente - por ejemplo- en el cartílago joven (condroblastos y matriz inmadura) y en los gránulos de las células cebadas.

RESULTADOS:
Ortocromasia: las estructuras basófilas aparecen teñidas de color azul.
Imagen: Soma neuronal del asta ventral de la médula espinal de rata.

RESULTADOS:
Metacromasia. las estructuras metacromáticas aparecen teñidas de color violeta.
Imagen: CSF de filamento primariobranquial de trucha arco iris.

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• CORTES SEMIFINOS
La inclusión de las muestras en resinas plásticas (como el Epon o la Araldita y similares) permite la obtención de cortes de grosor mucho más delgado que en el caso de la parafina. Aunque inicialmente esta técnica de inclusión se usó como un método para seleccionar regiones para la obtención decortes ultrafinos para la microscopía electrónica de transmisión, hoy en día se utiliza frecuentemente para la microscopía la óptica, ya que se obtiene una resolución mucho mayor.
El grosor de los cortes semifinos varía entre 0,5 y 5 m y se tiñen con diversas técnicas como el azul de toluidina o la hematoxilina-eosina. Usando resinas de bajo punto de solidificación es posible realizar tambiéntécnicas histoquímicas y de inmunomarcaje.
RESULTADOS: se puede apreciar la mayor resolución de la imagen.
Imagen: CSF de filamento branquial de trucha arco iris (Az. toluidina).

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• FOSFATASAS
Son un grupo de enzimas hidrolíticos que actúan sobre los ésteres del ácido fosfórico. Algunas fosfatasas actúan específicamente sobre un sustratodeterminado, por ejemplo la adenosina trifosfatasa, pero la mayoría actúan sobre diversos sustratos y su clasificación se basa en el pH al cual presentan una actividad óptima, diferenciándose dos grupos:
Fosfatasas alcalinas que exhiben actividad óptima a pH elevado (8,3 – 9,4)
Fosfatasas ácidas que presentan actividad óptima a pH bajo (4,7 – 5,5)
Las fosfatasas ácidas se localizan...