Histología

Fijadores químicos
 
Acetato mercúrico.- Produce mejor fijación que el ácido acético.
 
Acido acético.- Conserva la cromatina. Retrae los tejidos. Es más un conservante que un fijador.
 
Acético-ósmico-dicromato
Se trata de un fijador básico que preserva principalmente mitocondrias, núcleo y algunas veces vacuolas. Enviado por Emmel y Cowdry, este fijador es excelente para mitocondrias.Debido a la presencia de ácido ósmico, la penetración en los tejidos es lenta y no extensiva; por eso se deben usar muestras pequeñas.
Dicromato potásico (2.5% acuoso)---8 ml
Acido ósmico (2% acuoso)-----------2ml
Acido acético glacial------------- una gota
Fijar muestras pequeñas durante 24-48 horas, lavar en agua, deshidratar e imbibir en parafina.
 
Acido acético.- Conserva la cromatina.retrae los tejidos. es más un conservante que un fijador.
 
Acido crómico.- Se utiliza en soluciones al 2%. Hay que tener precaución al usarlo, puesto que disuelve las láminas medias y las celulosas. Después de una fijación de 1-2 horas, se debe sacar la muestra del mismo y pasarla a un conservador. Es un buen fijador si se toman las precauciones debidas.
El ácido crómico como fijador es el másusado en investigación citológica. Es un oxidante fuerte y fijador coagulante y resulta en una fijación ácida mostrando buena preservación de los ácidos nucleicos y proteínas. Las sales de cromo se disocian en soluciones acuosas formando complejos Cr-O-Cr, que reaccionan tanto con lípidos como con proteínas. El cromo, en la forma de dicromato potásico, es uno de los pocos fijadores (los otrosdebidos al tetróxido de osmio y mercurio) que preserva lípidos.
El ácido crómico tiende a encoger los tejidos de manera que es usado más frecuentemente en combinación con ácido acético, que hincha los tejidos.
Formulación débil:
Acido crómico (10% acuoso)-----2,5 ml
Acido acético (10% acuoso)--------5 ml
Agua destilada-------------------92.5 ml
 
Formulación media:
Acido crómico (10%acuoso)-----7 ml
Acido acético (10% acuoso)-----10 ml
Agua destilada-------------------83 ml
 
Acroleína
La acroleína es un fijador que penetra rápidamente en los tejidos y es muy bueno para fijar tejidos delicados y preservar vacuolas y orgánulos subcelulares. Generalmente la acroleina se reserva para métodos preparatorios que utilizan como medio de imbibició plásticos, ya que las estructuras finaspreservadas son retenidas pobremente por la parafina. La acroleína es inestable a la luz y a pH elevado, formando un disacril sólido.
La acroleína es un muy buen agente entrecruzador y puede reemplazar al glutaraldehido en la formulación de Karnovsky con paraformaldehido o puede ser utilizada sola. La acroleína también se ha mostrado que reacciona con ácidos grasos, por tanto estabilizandomembranas. El papel de las microtécnicas clásicas de plantas de Feder y O'Brien describieron el uso de la fijación con acroleína e infiltración en glicol metacrilato.
Precaución: la acroleina es tóxica y un lacrimador extremadamente volátil. Tener cuidado cuando se maneje este fijador.
El procedimiento es el siguiente:
1.- Fijar los especímenes en acroleína al 10% (acuoso) en tampón fosfato,cacodilato, o en un tampón Good.
2.- Deshidratar químicamente por transferencia directamente a 2-metoxietanol (metil o etil celosolve) a una concentración 0.1 mM pH 6.8, 12-24 horas a 4ºC.
 
Carmín acético hidrato de cloral.- Se trata de un fijador y colorante al mismo tiempo para la tinción de protalos de helechos. La siguiente formulación está preparada para 200 ml de fijador.
1. Añadir 100 ml de aguadestilada a 100 ml de ácido acético glacial.
2. Disolver en esta mezcla 2 g de carmín. Hervir suavemente durante 5 minutos en campana de gases.
3. Preparar el mordiente (sulfato férrico al 5%):por una parte añadir 0.5 g de sulfato férrico, por la otra 10 ml de la mezcla según la proporción: 0.5 ml de agua destilada + 5 ml de ácido acético glacial.
4. Dejar enfriar la mezcla de carmín.
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