Histología

Histologia
Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas ocupadas en los estudios de microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica. La Técnica Histológica abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes como se conocen, montados bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo microscopia ópticao electrónica.
Los procedimientos de la Técnica Histológica se resumen en las etapas siguientes:
Para empezar con la técnica histológica se debe obtener una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar y existen 2 formas:
Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.
Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional,excisional, por sacabocado, por punción y absorción, por raspado, por trepanación.
FIJACIÓN:
Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienen varias finalidades:
1. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.
3.Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.
Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la Autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM.
La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.
Los agentesmás usados para Microscopia de Luz son:
Formaldehído al 5%, Formol al 10% o Formalina (Solución de Formaldehído especial)
Puede usarse con amortiguadores o con otros fijadores.
Reacciona con los grupos aminos de las proteínas, formando enlaces transversales y conservando las estructuras de la célula.
Es el más usado es el Formol al 10%.
Glutaraldehído al 2.5%, Tetróxido de Osmio, Líquido deHelly y Fijador de Bouin
Funcionan formando enlaces transversales en las proteínas y manteniendo las estructuras de la célula.
El fijador de Bouin es una solución que contiene 75 ml de solución acuosa saturada de ácido pícrico, 25 ml de formol y 5 ml de ácido acético glacial.
El líquido de Helly es una solución con 2.5 g de bicromato de potasio, 5 g de cloruro de mercurio, 100 ml de agua y 5 mlde formol.
Cloruro de Mercurio y Ácido Picrico
Precipitan las proteínas.
Para Microscopia Electrónica se usan:
Glutaraldehído al 2.5%, Paraformaldehído, Tetróxido de Osmio y Permanganato de Potasio
Permiten conservar detalles estructurales finos, ya que otros fijadores como el formaldehído, son muy enérgicos en su acción con las proteínas.
Actúan como colorantes electrodensos, permitiendoobservar al tejido con el haz de electrones.
Una solución de Glutaraldehído al 2.5% en un tampón a pH 7.4, evita la violenta desnaturalización de las proteínas guardando detalles finos de la célula. Es el más usado en Microscopia Electrónica.
Regla de Oro para la Fijación
La mejor fijación es cuando a pasado el menor tiempo entre la muerte del tejido y la fijación.
Tamaño de la Muestra
Eltamaño de la muestra debe de ser de 2-3 cm. variando el estudio para lo cual de va a utilizar.
DESHIDRATACIÓN
Después que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador y se deshidrata.
Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas de menor a mayor de agente deshidratante, por ejemplo, Alcohol Etílico o Acetona. Iniciandocon alcohol al 50 %, luego con una solución de 60%, 70%, 80%, 90%, 96% y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100 % para eliminar el agua. Esto se hace por que si se colocara el tejido en una solución al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría muy rápido del tejido y se deformaría.
ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN
Luego de deshidratar el tejido, se pasa a una solución de una sustancia...