Histologia

HISTOLOGIA.
Preparación del tejido.
1.- El primer paso en la preparación de una muestra de tejido u órgano es la fijación para conservar la estructura.
La fijación, en general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezclas de estas sustancias conserva la estructura del tejido en forma permanente para permitir el tratamiento ulterior.
Además es importante sumergirla muestra en el fijador para:
1.- Interrumpir los procesos de degradación que aparecen tras la muerte celular (autólisis).
2.- Abolir el metabolismo celular
3.- Destruir los microorganismos patógenos como las bacterias, hongos o los virus.
4.- Endurecer el tejido como consecuencia de la formación de enlaces cruzados o la desnaturalización de las moléculas proteicas.
El fijador de uso común esla formalina (Formol 10% en PBS ), una solución acuosa de formaldehido al 37%, en diluciones variadas y en combinación con otras sustancias químicas y amortiguadores.
El formaldehido preserva la estructura general de la célula y de los componentes extracelulares al reaccionar con los grupos amino de las proteínas, pero dado que el mismo no altera en forma significativa su estructuratridimensional, las proteínas mantienen su capacidad de reaccionar con anticuerpos específicos.
Sin embargo, el formaldehido no reacciona con los lípidos y, por lo tanto, es un mal fijador de las membranas.
NOTA  La muestra se coloca en 4 veces el tamaño en formol.
1.2.- Deshidratación.
Se elimina completamente el agua del tejido para poder embeberlo adecuadamente en medios de inclusión (nohidrosolubles).
Se suele utilizar alcohol etílico en concentraciones crecientes hasta llegar al 100%.
1.3.- Aclaramiento
Sustitución del agente deshidratante por una sustancia miscible (compatible) con el medio de inclusión.
Usualmente se realiza con xileno (Xilol) aunque también puede ser tolueno. Y le otorga transparencia al tejido.
2.- En el segundo paso la muestra se dispone para su inclusión oinfiltración en parafina con el fin de permitir su corte.
Se realiza mediante baños sucesivos en parafina fundida. Cuando la parafina se ha enfriado y endurecido se empareja para formar un bloque de tamaño adecuado.
2.1.- Preparación del taco o bloque de tejido: Obtención de un bloque sólido de tejido incluido por enfriamiento lento a 10-15 °C.
Este bloque llamado taco se coloca entonces en unamaquina cortadora especial, el micrótomo, que lo corta en rebanadas finas con una cuchilla de acero. (3-8 µm de grosor).
En el tercer paso, la muestra se tiñe para permitir su examen.
Dado que los cortes en parafina son incoloros, la muestra todavía no esta lista para su examen bajo el microscopio óptico. Para colorear o teñir los cortes histológicos la parafina debe disolverse y extraerse, denuevo con xileno o tolueno, y los tejidos deben rehidratarse mediante el uso de una serie de alcoholes de concentración decreciente.
Luego el tejido colocado sobre los portaobjetos se tiñe con hematoxilina en agua (de color violeta azulado), como el colorante de contraste, la eosina (de color rosado pálido) es mas soluble en alcohol que en agua, se vuelve a deshidratar la muestra en solucionesalcohólicas de concentración creciente y después se tiñe con eosina en alcohol. Luego de la coloración la muestra se hace pasar por xileno o tolueno y se le coloca un montaje no acuoso (albúmina) antes de cubrirla con un portaobjetos para lograr un preparado permanente.
Histoquímica y Citoquimica.
“Son los procedimientos estructurales químicos específicos pueden proveer información detalladaacerca de la función de las células y los componentes extracelulares de los tejidos”.
El fundamento de las métodos histoquímicos y citoquimicos pueden tener su fundamento en la unión especifica de un colorante, y el uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente, es decir, el fundamento de cualquier método de tinción radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y...