HISTOLOGIA

Alumno: Rafael Lopes Rezende

Técnicas Histológicas y Microscopia



Preparación del Tejido
1º Paso: Obtención de la muestra:
Biopsia; tejido vivo. Autopsia; tejido muerto.
Necropsia; tejido podrido - necrosado.
2º Paso: Fijación:
En general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezclas de estas;
El fijador de uso más común es la formalina (solución acuosade formaldehido al 37%); Este fijador no reacciona con los lípidos, por lo tanto es un mal fijador de las membranas;
3º Paso: Deshidratación:
Luego después de la fijación, se lava y deshidrata la muestra en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta llegar al 100%;
Después de eso, se utilizan solventes como el xileno o tolueno para extraer el alcohol al100%
4º Paso: Inclusión:
Incluir la muestra en la parafina fundida a 60 grados;
Luego después que la parafina se ha enfriado y endurecido se obterá un bloque denominado taco;
Coloca-se el taco en una maquina denominada micrótomo, que se encargará de hacer cortes de 5 a 15 µ m (micras) (1 micra equivale a milésima parte de 1 milímetro);
5º Paso: Coloración:
Después de loscortes hay que hidratar la muestra con una serie de soluciones alcohólicas en porción decreciente para que se pueda colorear con hematoxilina (color azul) y después otra vez deshidratar con una serie de soluciones alcohólicas en porción creciente para que se pueda colorear con eosina (color rosa).


Microscopia
Microscopia Óptica
Microscopio de campo claro: es actualmente elmicroscopio más utilizado por los estudiantes, ello es el microscopio descendente de los utilizados en el siglo XIX. Sus componentes son los siguientes:
o Fuente luminosa;
o Condensador;
o Platina;
o Objetivo;
o Ocular.
Las muestras a seren observadas en ese tipo de microscopio tiene que ser extremamente
finas, para que la luz pase a través de ella, y coloreadas con eosina yhematoxilina. Sin eses pré-requisitos la muestra no se produce grado de contraste suficiente para estudio.


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Alumno: Rafael Lopes Rezende

Microscopio de campo escuro: en ese tipo de microscopio, la lente objetiva no capta luz directa proveniente de la fuente luminosa. El está provisto de un condensador especial que elimina el preparado con mucha intensidad y en forma muy oblicua.Solamente los rayos de luz refractados por las estructuras de la muestra penetran la lente objetiva. La resolución del microscopio de campo escuro no es mejor que la de campo claro, pero se puede detectar partículas más pequeñas.
Microscopio de fluorescencia: Aprovecha la capacidad algunas moléculas de florecer bajo la luz ultravioleta, como a vitamina A y algunos neurotransmisores. Lafunción del microscopio de fluorescencia es estudiar la fluorescencia secundaria, que es detectar antígenos o anticuerpos en las técnicas de inmunocitoquimica.
Microscopio confocal de barrido: combina componentes de un microscopio de campo claro con un sistema de barrido para disecar ópticamente una muestra. Fuiste desarrollado para estudiar la estructura de materiales biológicos.Poseí un sistema de iluminación a laser que produce un punto de barrido muy superficial.
Microscopio de luz ultravioleta: La imagen en este tipo de microscopio depende de la absorción de la luz UV por las moléculas de la muestra. La muestra no puede inspeccionar- se en forma directa a través del ocular porque la UV no es visible y lesiona el ojo, entonces los resultados se registran en una placafotográfica para q se pueda analizar-se.
Microscopio de polarización: es una simple modificación del microscopio de campo claro en el cual un filtro de polarización se coloca entre la fuente de luz y la muestra, y un segundo filtro se coloca entre o objetivo del microscopio y el observador;


Microscopia Electrónica
Microscopio electrónico de transmisión (MET); utiliza la interacción de un...