Histologia

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CURSO DE HISTOLOGIA

PRACTICA Nº 1
PASOS DE LAS TÉCNICAS MICROSCÓPICAS
Los pasos de las técnicas microscópicas para obtener un preparado histológico permanente (láminas) son:
1. Toma de la muestra.
2. Fijación.
3. Inclusión.
4. Microtomía.
5. Coloración.
1. TOMA DE LA MUESTRA

El material a utilizar puede ser extraído de los diversos animales de laboratorio, o bienpuede tratarse de material humano. Entre los animales de observación se eligen aquellos que por su semejanza con el ser humano pueden sustituirlo sin grandes diferencias, y cuya obtención y crianza puede ser fácilmente efectuada en el laboratorio.

De tres fuentes puede provenir el material humano: las necropsias, las biopsias y las piezas operatorias. De éstas, sólo la primera puededarnos material normal; las dos últimas proporcionarán tejidos patológicos.

- Necropsias, Biopsias, Piezas operatorias.

FIJACIÓN
A fin de evitar la destrucción de las células por sus propias enzimas (autólisis), o por bacterias, los tejidos separados del cuerpo de un animal (especimenes) deben ser fijados, inmediatamente después de ser cortados. Este tratamiento denominadofijación tiene por finalidad endurecer los tejidos, volviéndolos más resistentes para las etapas subsiguientes de las técnicas microscópicas.

Preparación de: Solución de formol al 10%.
Para lo cual tendrán que realizar los cálculos respectivos, teniendo en cuenta el volumen indicado por sus profesores además, de la información técnica inscrita en los reactivos
c1xv1= c2xv2
0.4 x v1 = 0.1 x1000
V1 = 0.1 x 1000 / 0.4
V1 = 250 cc


DESHIDRATACIÓN E INCLUSIÓN EN PARAFINA


Deshidratación


Las piezas al ser retiradas del fijador, o después de haberlas lavado, están embebidas en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar, debemos deshidratar los tejidos sumergiéndolos en líquidos anhidros, ávidos de agua. Para evitaralteraciones provocadas por una deshidratación brusca, se aconseja proceder escalonadamente utilizando, preferentemente, alcohol etílico de graduación creciente.


Impregnación por un disolvente de la parafina (aclaración)


Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente, xilol. Al agregar el xilol, no debe aparecer ninguna turbidez. Si se pone blanco-lechosoes que la deshidratación no ha sido bien lograda y debemos repetir el baño de alcohol absoluto cerciorándonos que realmente lo sea: una gota de alcohol agregada a unos ml de xilol no debe enturbiarlo.


Penetración de la parafina


Se sumergen las piezas en parafina (56-58º de punto de fusión), mantenida líquida en la estufa a no más de 62ºC. Después de 1 a 2 horas se renueva laparafina.


Inclusión definitiva o formación del bloque


En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se vierte la parafina fundida, del mismo punto de fusión de la que ha servido para la penetración. Se colocan las piezas orientándolas y luego se pone el molde en heladera.


A los 15-30 minutos la parafina se habrá solidificado y ya podemos realizar loscortes con el micrótomo.


OBTENCIÓN DE CORTES


Los micrótomos son instrumentos de gran precisión que nos proporcionan cortes delgados parejos y de espesor graduable. Los cortes más corrientes son los de 4-6 micrones.


Consideraremos cuatro tipos de micrótomos: el de deslizamiento, el tipo Minot, el de congelación, y el criostato o criótomo.


- Tipodeslizamiento: en este caso la pieza queda fija mientras la cuchilla se desliza por unas guías especiales merced a un soporte al que se sujeta la cuchilla con unos tornillos.


- Tipo Minot: en este caso la cuchilla queda fija y es la pieza la que se desliza sujeta a una platina, ésta se desliza verticalmente cuando se hace girar una manivela. Permite obtener cortes seriados en forma de cinta....