HISTOLOGÍA

TECNICAS HISTOLOGICAS

METODO CIENTIFICO :
INTRODUCCION ………………………………………………………………… 1





















1. INTRODUCCION :

En el siguiente informe sobre técnicas histológicas vamos a describir los procesos experimentales necesarios para obtener secciones teñidas y listas para observar el microscopio partiendo de tejidos vivos extraídos de un animal o de un vegetal.Por tanto hablaremos sobre la obtención, fijación, deshidratación, aclaramiento, inclusión, corte y tinción de los tejidos.
La mayoría de las técnicas histológicas van encaminadas a preparar el tejido para su observación con el microscopio, bien sea óptico o electrónico, ya que la estructura de los tejidos esta basada en la organización de los tipos de célula que los componen y solo en algunasocasiones las características morfológicas de las células solo se pueden observar con estos aparatos .por lo tanto:
Se denomina TÉCNICA HISTOLOGICA al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de losmicroscopios ópticos y electrónicos.















2. CONTENIDO :

2.1. OBTENCION
Para empezar con la técnica histológica se debe obtener una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar y existen 2 formas:
Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.
Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional,excisional, por sacabocado, por punción y absorción, por raspado, por trepanación.
2.2. FIJACIÓN
Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienen varias finalidades:
1. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado en vivo.
2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.
3.Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.
Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la Autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM.
La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.
Losagentes más usados para Microscopia de Luz son:
Formaldehído al 5%, Formol al 10% o Formalina (Solución de Formaldehído especial)
Puede usarse con amortiguadores o con otros fijadores.
Reacciona con los grupos aminos de las proteínas, formando enlaces transversales y conservando las estructuras de la célula.
Es el más usado es el Formol al 10%.
Glutaraldehído al 2.5%, Tetróxido de Osmio, Líquidode Helly y Fijador de Bouin
Funcionan formando enlaces transversales en las proteínas y manteniendo las estructuras de la célula.
El fijador de Bouin es una solución que contiene 75 ml de solución acuosa saturada de ácido pícrico, 25 ml de formol y 5 ml de ácido acético glacial.
El líquido de Helly es una solución con 2.5 g de bicromato de potasio, 5 g de cloruro de mercurio, 100 ml de agua y 5ml de formol.
Cloruro de Mercurio y Ácido Picrico
Precipitan las proteínas.
Para Microscopia Electrónica se usan:
Glutaraldehído al 2.5%, Paraformaldehído, Tetróxido de Osmio y Permanganato de Potasio
Permiten conservar detalles estructurales finos, ya que otros fijadores como el formaldehído, son muy enérgicos en su acción con las proteínas.
Actúan como colorantes electrodensos,permitiendo observar al tejido con el haz de electrones.
Una solución de Glutaraldehído al 2.5% en un tampón a pH 7.4, evita la violenta desnaturalización de las proteínas guardando detalles finos de la célula. Es el más usado en Microscopia Electrónica.
Regla de Oro para la Fijación
La mejor fijación es cuando a pasado el menor tiempo entre la muerte del tejido y la fijación.
Tamaño de la Muestra
El...