historia del confocal
Páginas: 8 (1871 palabras)
Publicado: 11 de junio de 2014
Historia
En 1957 Marvin Minski padre de la inteligencia artificial estudiando el sistema nervioso pensó que si el pudiera verlo en sus diferentes niveles podría entender como funcionaban los circuitos neuronales, entonces fue así como desarrolló esta técnica llamada por el microscopio de barrido por etapas, de doble enfoque”.
Marvin Minsky en los años cincuenta construyó y patentó unmicroscopio de barrido por etapas de doble enfoque que permitía observar con claridad capas sucesivas de una muestra sin tener que rebanar el espécimen en finos cortes. Treinta años después su método es llamado microscopia de barrido confocal, proceso de microscopia óptica más notable en nuestro siglo. (1)
El microscopio de barrido confocal combina el microscopio de fluorescencia con imagenelectrónica y puntos de luz suministrados por láser dirigido al espécimen en particular para obtener imágenes tridimensionales (2).
En los microscopios ópticos cuando el objetivo enfoca luz tomada de planos por encima y por debajo de la superficie que se observa, la imagen se hace rápidamente borrosa, entonces, Minski pensó que lo ideal seria recoger la luz reflejada del plano de interéssolamente, pero sin embargo los tejidos ubicados por encima y por debajo de ese plano también refleja luz mostrando imágenes borrosas. La dispersión disminuye el contraste y se produce cuando la luz incide sobre las partículas y estas la reflejan a otras partículas adyacentes hasta alcanzar la superficie detectora.
Entonces Minski hizo pasar la luz de iluminación a través de un objetivo pinhole,que enfoca los rayos garantizando un punto de luz nítido e intenso sobre una porción mínima de la muestra a la profundidad deseada, así garantizaba que esa zona sería la más intensamente iluminada y en consecuencia la que más luz reflejaba.
Sin embargo de esta manera no garantizaba que la luz devuelta por los tejidos que estaban por encima y por debajo del punto que él quería observar nollegaran a la superficie del detector. Entonces realizó un segundo ajuste, impidiendo también que la luz que el tejido encima y debajo del plano focal reflejaba alcanzara la superficie receptora, por medio de una mascara con una apertura pequeña, de modo que solo la luz de regreso reflejada por el plano focal pasara a través de el orificio hasta la superficie detectora (1).
Componentes
Fuenteluminosa: Luz amplificada por emisión estimulada de radiación, Láser (Light amplification by stimulated emission of radiation).
Espejo dicroico: Refleja totalmente la luz que incide con un ángulo de cerca de 45°. El termino dicroico proviene de dicroísmo del griego dichromatismós y es la propiedad de presentar de manera alternativa dos coloraciones según la dirección de los rayos de luzincidentes.
Ranura detectora Pinhole: Esta ranura sólo permite el paso de la luz reflejada por el plano focal.
Lente objetivo: Permite enfocar el rayo de luz reflejado por el espejo dicroico hacia el plano focal de la muestra.
Detector: Recibe el haz de luz y genera una imagen.
Principios del funcionamiento
Debido a que la cantidad de luz incidente sobre la muestra es tan pequeña, esnecesario usar fuentes poderosas. La fuente de luz es un rayo láser que se hace pasar a través del pinhole, este haz de luz pasa a través del espejo, posteriormente el haz pasa a través del lente objetivo el cual lo enfoca sobre la muestra.
La luz emitida por la muestra es recibida por el lente objetivo y reflejada por el espejo dicroico que refleja totalmente la luz que llega en un ángulo de45°. Esta luz pasa a través de la apertura pinhole que no permite el paso de la fluorescencia originada por los planos fuera de foco. Entonces sólo la luz del plano focal llega al detector. Inicialmente este tipo de técnica permitía observar claramente un sólo punto por lo cual era necesario hacer un barrido de la muestra, que requería un mayor tiempo para obtener una imagen completa.Para acelerar...
En 1957 Marvin Minski padre de la inteligencia artificial estudiando el sistema nervioso pensó que si el pudiera verlo en sus diferentes niveles podría entender como funcionaban los circuitos neuronales, entonces fue así como desarrolló esta técnica llamada por el microscopio de barrido por etapas, de doble enfoque”.
Marvin Minsky en los años cincuenta construyó y patentó unmicroscopio de barrido por etapas de doble enfoque que permitía observar con claridad capas sucesivas de una muestra sin tener que rebanar el espécimen en finos cortes. Treinta años después su método es llamado microscopia de barrido confocal, proceso de microscopia óptica más notable en nuestro siglo. (1)
El microscopio de barrido confocal combina el microscopio de fluorescencia con imagenelectrónica y puntos de luz suministrados por láser dirigido al espécimen en particular para obtener imágenes tridimensionales (2).
En los microscopios ópticos cuando el objetivo enfoca luz tomada de planos por encima y por debajo de la superficie que se observa, la imagen se hace rápidamente borrosa, entonces, Minski pensó que lo ideal seria recoger la luz reflejada del plano de interéssolamente, pero sin embargo los tejidos ubicados por encima y por debajo de ese plano también refleja luz mostrando imágenes borrosas. La dispersión disminuye el contraste y se produce cuando la luz incide sobre las partículas y estas la reflejan a otras partículas adyacentes hasta alcanzar la superficie detectora.
Entonces Minski hizo pasar la luz de iluminación a través de un objetivo pinhole,que enfoca los rayos garantizando un punto de luz nítido e intenso sobre una porción mínima de la muestra a la profundidad deseada, así garantizaba que esa zona sería la más intensamente iluminada y en consecuencia la que más luz reflejaba.
Sin embargo de esta manera no garantizaba que la luz devuelta por los tejidos que estaban por encima y por debajo del punto que él quería observar nollegaran a la superficie del detector. Entonces realizó un segundo ajuste, impidiendo también que la luz que el tejido encima y debajo del plano focal reflejaba alcanzara la superficie receptora, por medio de una mascara con una apertura pequeña, de modo que solo la luz de regreso reflejada por el plano focal pasara a través de el orificio hasta la superficie detectora (1).
Componentes
Fuenteluminosa: Luz amplificada por emisión estimulada de radiación, Láser (Light amplification by stimulated emission of radiation).
Espejo dicroico: Refleja totalmente la luz que incide con un ángulo de cerca de 45°. El termino dicroico proviene de dicroísmo del griego dichromatismós y es la propiedad de presentar de manera alternativa dos coloraciones según la dirección de los rayos de luzincidentes.
Ranura detectora Pinhole: Esta ranura sólo permite el paso de la luz reflejada por el plano focal.
Lente objetivo: Permite enfocar el rayo de luz reflejado por el espejo dicroico hacia el plano focal de la muestra.
Detector: Recibe el haz de luz y genera una imagen.
Principios del funcionamiento
Debido a que la cantidad de luz incidente sobre la muestra es tan pequeña, esnecesario usar fuentes poderosas. La fuente de luz es un rayo láser que se hace pasar a través del pinhole, este haz de luz pasa a través del espejo, posteriormente el haz pasa a través del lente objetivo el cual lo enfoca sobre la muestra.
La luz emitida por la muestra es recibida por el lente objetivo y reflejada por el espejo dicroico que refleja totalmente la luz que llega en un ángulo de45°. Esta luz pasa a través de la apertura pinhole que no permite el paso de la fluorescencia originada por los planos fuera de foco. Entonces sólo la luz del plano focal llega al detector. Inicialmente este tipo de técnica permitía observar claramente un sólo punto por lo cual era necesario hacer un barrido de la muestra, que requería un mayor tiempo para obtener una imagen completa.Para acelerar...
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