Hola Q Hace
Páginas: 17 (4050 palabras)
Publicado: 6 de marzo de 2013
IIIa. METODOS DIRECTOS
Son aquellos que detectan:
1. El virus como agente infeccioso (aislamiento viral).
2. La presencia de antígenos virales (técnicas
inmunológicas): Inmunofluorescencia (IF),
Enzimoinmunoanálisis (EIA), Test de Aglutinación.
3.La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, etc.).
4.El virus como partícula viral (microscopía electrónica).
Los cultivoscelulares se dividen en:
Cultivos Primarios: Se obtienen a partir de células,
tejidos u órganos tomados directamente del organismo y
puedensubcultivarse una o dos veces.
Líneas Celulares Diploides: Son aquellas que crecen en
pasajes sucesivos hasta aproximadamente 50 subcultivos
y que conservan por lo menos en un 75% el cariotipo
correspondiente a la especie de que provienen.Líneas Celulares Continuas: Permite un número finito
desubcultivos y son heteroploides. Para considerar que
se ha logrado establecer una línea continua, esta debe de
haber sido subcultivada por lo menos 70 veces.
Las líneas celulares continuas ofrecen las siguientes
ventajas:
• Disponibilidad para todos los investigadores de
stocks de células idénticas, ya sea congeladas enampollas o en monocapa de botella de cultivos, con
la posibilidad de reconstituirlas cuando sea
necesario.
• Facilidad relativa del pasaje y mantenimiento en
todos los laboratorios.
• Libre de contaminación con agentes extraños.
Los distintos cultivos celulares varían en cuanto a su
susceptibilidad a los diferentes virus, ya que existe una
relación específicahuésped-virus, y es en función de los
datos clínicos y del tipo de muestra que se elige el
cultivo para inocular el material. Así por ejemplo la línea
celular HEP-2, son células heteroploides humanas
derivadas de carcinoma laríngeo y se recomiendan para
virus respiratorio sincicial (VRS) y Adenovirus.
La MRC5, es una línea diploide fibroblástica de pulmón
embrionario humano, que se utilizapara el aislamiento
deCitomegalovirus (CMV), VRS, Herpes, Echo virus,
etc. La MDCK, es una línea celular diploide de riñón
canino que se recomienda para el aislamiento del virus
Influenza
Luego de inoculado el cultivo celular, se incuba a 35-37º
C por un período de hasta 14 días promedio, esperando
la aparición de efecto citopático, toxicidad o
degeneración celular,observando el cultivo al
microscopio a las 24, 48, 72hs y luego 2 veces por
semana. Se usan cultivos celulares no inoculados para
control y comparación con cualquier cambio
morfológico observado en los cultivos inoculados. El
efectocitopático es la visualización de cambios
morfológicos más o menos característicos en las células
inoculadas producidas por la acción del virus sobre elcultivo celular. Así, por ejemplo, el VRS forma sincicios
o células gigantes en HEP-2. Los Adenovirus, células
redondeadas en HEP-2, con formación de racimos
dejando áreas sin células.
Cuando los virus no producen efecto citopático, se puede
recurrir a técnicas que ponen en evidencia la presencia
de aquel en el cultivo. Las más usadas son:
hemadsorción, hemaglutinación ytinciones con
anticuerpos monoclonales. (Ver 2)
Hemadsorción: Hay virus que durante su multiplicación
intracelular, expresan en la membrana de la célula
huésped elementos estructurales virales llamados
hemaglutininas, glicoproteínas capaces de unirse a
receptores específicos en la membrana de glóbulos rojos
de diferentes especies animales. De modo que si se
agregan glóbulosrojos a un cultivo inoculado, se puede
poner en evidencia la infección de esas células a través
de la unión de los glóbulos rojos a la superficie celular.4
Hemaglutinación: Las hemaglutininas pueden ponerse
en evidencia en el sobrenadante de los cultivos utilizando
el mismo fundamento que para la hemadsorción.
2. Detección de Antígenos - Técnicas Inmunológicas
Las técnicas...
Son aquellos que detectan:
1. El virus como agente infeccioso (aislamiento viral).
2. La presencia de antígenos virales (técnicas
inmunológicas): Inmunofluorescencia (IF),
Enzimoinmunoanálisis (EIA), Test de Aglutinación.
3.La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, etc.).
4.El virus como partícula viral (microscopía electrónica).
Los cultivoscelulares se dividen en:
Cultivos Primarios: Se obtienen a partir de células,
tejidos u órganos tomados directamente del organismo y
puedensubcultivarse una o dos veces.
Líneas Celulares Diploides: Son aquellas que crecen en
pasajes sucesivos hasta aproximadamente 50 subcultivos
y que conservan por lo menos en un 75% el cariotipo
correspondiente a la especie de que provienen.Líneas Celulares Continuas: Permite un número finito
desubcultivos y son heteroploides. Para considerar que
se ha logrado establecer una línea continua, esta debe de
haber sido subcultivada por lo menos 70 veces.
Las líneas celulares continuas ofrecen las siguientes
ventajas:
• Disponibilidad para todos los investigadores de
stocks de células idénticas, ya sea congeladas enampollas o en monocapa de botella de cultivos, con
la posibilidad de reconstituirlas cuando sea
necesario.
• Facilidad relativa del pasaje y mantenimiento en
todos los laboratorios.
• Libre de contaminación con agentes extraños.
Los distintos cultivos celulares varían en cuanto a su
susceptibilidad a los diferentes virus, ya que existe una
relación específicahuésped-virus, y es en función de los
datos clínicos y del tipo de muestra que se elige el
cultivo para inocular el material. Así por ejemplo la línea
celular HEP-2, son células heteroploides humanas
derivadas de carcinoma laríngeo y se recomiendan para
virus respiratorio sincicial (VRS) y Adenovirus.
La MRC5, es una línea diploide fibroblástica de pulmón
embrionario humano, que se utilizapara el aislamiento
deCitomegalovirus (CMV), VRS, Herpes, Echo virus,
etc. La MDCK, es una línea celular diploide de riñón
canino que se recomienda para el aislamiento del virus
Influenza
Luego de inoculado el cultivo celular, se incuba a 35-37º
C por un período de hasta 14 días promedio, esperando
la aparición de efecto citopático, toxicidad o
degeneración celular,observando el cultivo al
microscopio a las 24, 48, 72hs y luego 2 veces por
semana. Se usan cultivos celulares no inoculados para
control y comparación con cualquier cambio
morfológico observado en los cultivos inoculados. El
efectocitopático es la visualización de cambios
morfológicos más o menos característicos en las células
inoculadas producidas por la acción del virus sobre elcultivo celular. Así, por ejemplo, el VRS forma sincicios
o células gigantes en HEP-2. Los Adenovirus, células
redondeadas en HEP-2, con formación de racimos
dejando áreas sin células.
Cuando los virus no producen efecto citopático, se puede
recurrir a técnicas que ponen en evidencia la presencia
de aquel en el cultivo. Las más usadas son:
hemadsorción, hemaglutinación ytinciones con
anticuerpos monoclonales. (Ver 2)
Hemadsorción: Hay virus que durante su multiplicación
intracelular, expresan en la membrana de la célula
huésped elementos estructurales virales llamados
hemaglutininas, glicoproteínas capaces de unirse a
receptores específicos en la membrana de glóbulos rojos
de diferentes especies animales. De modo que si se
agregan glóbulosrojos a un cultivo inoculado, se puede
poner en evidencia la infección de esas células a través
de la unión de los glóbulos rojos a la superficie celular.4
Hemaglutinación: Las hemaglutininas pueden ponerse
en evidencia en el sobrenadante de los cultivos utilizando
el mismo fundamento que para la hemadsorción.
2. Detección de Antígenos - Técnicas Inmunológicas
Las técnicas...
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