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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE AGUASCALIENTES





PRE-REPORTE N° 7
C. CIENCIAS BASICAS.
DEP. QUIMICA.
LAB. DE BIOQUIMICA.

PRACTICA N° 7: PREPARACION DE UNA CURVA PATRON PARA GLUCOSA.

MAESTRO QFB.: REFUJIO JASSO GONZALES.

ALUMNO: MARIA ISABEL ORTIZ QUIROZ.

AGUASCALIENTES AGS. LUNES 14/OCTUBRE/2013
OBJETIVOS:
1.- Preparar una curva patrón para glucosa.
2.- Determinar la curvade concentración de glucosa de una solución problema, interpolando la curva patrón.
INTRODUCCION:
Una curva patrón se construye usando soluciones de concentraciones conocidas de un compuesto determinado. Por ejemplo se grafica concentración Vs absorbancia y se establece una recta en la que cada punto corresponde a una concentración distinta y por ende una absorbencia distinta. Luego una vez quetienes los puntos, haces la recta de regresión, que es la recta que mejor aproxima al conjunto de puntos que estas analizando. Una vez que tienes la recta, sacas su ecuación.
Tienes una solución que contiene el mismo compuesto que el que usaste para construir la curva, le mides la absorbancia y con la ecuación de la recta calculas la concentración de dicha muestra problema.
Principio del método: 
La enzima glucosa oxidasa a un pH determinado, actúa sobre la glucosa oxidándola 
con formación de ácido glucurónico y peróxido de hidrógeno, éste por acción de la 
peroxidasa deja libre oxígeno activo que se hace reaccionar con la o-toluidina 
formando un complejo colorido que absorbe en la región visible a 530 nm. 

8.2.1.2 Reactivos y soluciones: 
• Glucosa oxidasa: Tipo II,purificada de 15.000-20.000 u/g. Sigma Chemical Co. G6125 
o equivalente. 
• Peroxidasa: Tipo I. P8125 
• Diclorhidrato de o-toluidina 
• Solución de glucosa oxidasa-peroxidasa: en 200 ml de solución reguladora de pH 
7,6, disolver 60 mg de glucosa oxidasa y 16 mg de peroxidasa. Agregar una 
solución de 135 mg de di clorhidrato de o-toluidina en 260 ml de agua destilada. 
Guardar en refrigeración enfrasco oscuro. De ser necesario, filtrar antes de usar. 
Esta solución es estable por 6 semanas a 4ºC. 
• Solución reguladora tris pH 7,6: Disolver 48,44 g de tris (hidroximetil) aminometano 
en 500 ml de agua destilada, añadir 384 ml de ácido clorhídrico 0,8 M; ajustar el 
pH a 7,6 si es necesario y aforar a un litro con agua destilada. 
• Acido clorhídrico 4 N: En 200 ml de agua destiladaagregar 330 ml de HCI 
concentrado (densidad = 1,19 g/ml, pureza = a 37.2 %) moviendo constantemente 
y aforar a un litro con agua destilada. 
• Acido clorhídrico 6 N: En 200 ml de agua destilada agregar 494 ml de HCI 
concentrado (densidad = 1,19 g/ml, pureza = a 37.2 %) moviendo constantemente 
y aforar a un litro con agua destilada. 
• Acido clorhídrico 0.8 N: En 200 ml de agua destiladaagregar 66 ml de HCI 
concentrado (densidad = 1,19 g/ml, pureza = a 37.2 %) moviendo constantemente 
y aforar a un litro con agua destilada. 
• Hidróxido de sodio 5 N: Disolver 200 g de NaOH (reactivo analítico libre de 
carbonatos y humedad) en 500 ml de agua destilada y aforar a un litro con agua 
destilada. 
• Solución Patrón de Glucosa 0,1 mg/ml: en un matraz volumétrico de 250 ml, disolver 25 mg de glucosa (reactivo analítico) con 25 ml de agua. Calentar hasta 
ebullición durante 2 minutos y enfriar a temperatura ambiente y aforar al volumen 
con agua destilada. 
• Indicador de fenolftaleína 0,1 %: en 50 ml de etanol disolver 0,1 g de fenolftaleína y  llevar a 100 ml con etanol.

PROCEDIMIENTO:
1.- Disponga 6 tubos de ensaye de la manera siguiente:
TUBO.
1 (blanco)2
3
4
5
6 (problema)
Patrón de glucosa (ml)
0
0.25
0.50
0.75
1.0
0
Agua destilada (ml)
1.0
0.75
0.50
0.25
0
0
Reactivo de cobre (ml)
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
Sol. Problema (ml)
0
0
0
0
0
1.0

2.- Agitar e incubar durante 20 min. a ebullición.
3.- Permita que los tubos se enfríen añadiendo:
Reactivo de fosfomolibdato (ml)
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
Agua...