Hola
Páginas: 13 (3159 palabras)
Publicado: 6 de diciembre de 2012
Informe de laboratorio
Genética Molecular
28 de Noviembre del 2012
Resumen
En este trabajo práctico, por medio de técnicas de estudio de DNA, se analizaron distintas muestras de mucosa yugal de varios donantes y de algunos familiares de los mismos. En cada caso, se analizó el sexo de los donantes por amplificación en PCR del gen de amelogenina, corroborando laefectividad de esta técnica para la identificación de género en muestras incógnita. Para ciertas muestras se analizó también la heredabilidad del genoma mitocondrial materno por digestión de DNAmt y posterior análisis de los polimorfismos. En todos los casos, se comprobó que los patrones de digestión para muestras de donantes emparentados (donante y pariente -linaje materno- de donante) presentanlos mismos polimorfismos.
Introducción
El análisis de la molécula de DNA constituye una herramienta muy valiosa que ha permitido delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnostico de innumerables entidades de origen genético, basado esto en el principio que la molécula de DNA es única en cada individuo y que contiene la información necesaria para el desarrollo yfunción de los organismos.
El DNA puede ser extraído de muchos tipos de materiales biológicos (sangre, tejido, hueso, etc.) y el éxito del análisis molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de calidad, cantidad y pureza; es necesario separar el DNA del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente. Los protocolos de buscan, en general,eliminar potentes inhibidores de reacciones de amplificación PCR tales como DNAsas, RNAsas y grupos hemo, que dificulten análisis posteriores.
La extracción del ADN es el primer paso para el posterior análisis de este, existen muchos métodos para la extracción de ADN de acuerdo al tipo celular que lo posea, ya sean plantas, animales o bacteria. El proceso general para aislar el DNA genómicoinvolucra los siguientes pasos fundamentales: primero, es necesario homogeneizar las células y distar los núcleos de los cuales se extrae el DNA. Luego se deben realizar procesos de digestión, por lo cual se requiere un medio de extracción debe contener un detergente, como el SDS, buffer TE (compuesto por Tris y EDTA) y proteinasa K, que sirven para lisar los núcleos y liberar el DNA al emulsionarlos lípidos de las membranas celulares y romperlas. En segundo lugar, se debe separar el DNA de materiales contaminantes, como RNA y proteína con el agregado de sales, soluciones amortiguadoras, fenol y cloroformo; para ello se realiza una extracción orgánica. Las sales aumentan la solubilidad del DNA, generando un apantallamiento de cargas. Entre las más utilizadas se encuentra el LiCl, ya queofrece mayor eficiencia de obtención de ADN al generar un mayor apantallamiento de cargas gracias a su pequeño tamaño pequeño. El fenol y el cloroformo son desnaturalizantes activos de proteínas que suprimen la solubilidad de las mismas en la preparación y las precipitan. Puesto que el fenol y la solución salina amortiguadora no se mezclan, solo se requiere realizar centrifugaciones para obtener unaseparación de fases, permaneciendo el DNA (y el RNA) en la fase acuosa superior y las proteínas presentes como un precipitado concentrado en la interfase. La fase acuosa se retira del tubo y se somete a ciclos repetidos de agitación con fenol y centrifugación hasta agotar toda la proteína de la solución. Parte del RNA precipita, pero siempre quedan cantidades detectables de esta molécula, a menosque se utilicen RNAsas durante el proceso de extracción. Finalmente, el DNA purificado se suele concentrar mediante precipitaciones alcohólicas. El cambio de polaridad del medio que genera el agregado de alcohol y la disminución de la temperatura vuelven insoluble al DNA, pudiéndose recuperar en un precipitado si es centrifugado a altas velocidades. Una vez realizada la extracción se debe...
Genética Molecular
28 de Noviembre del 2012
Resumen
En este trabajo práctico, por medio de técnicas de estudio de DNA, se analizaron distintas muestras de mucosa yugal de varios donantes y de algunos familiares de los mismos. En cada caso, se analizó el sexo de los donantes por amplificación en PCR del gen de amelogenina, corroborando laefectividad de esta técnica para la identificación de género en muestras incógnita. Para ciertas muestras se analizó también la heredabilidad del genoma mitocondrial materno por digestión de DNAmt y posterior análisis de los polimorfismos. En todos los casos, se comprobó que los patrones de digestión para muestras de donantes emparentados (donante y pariente -linaje materno- de donante) presentanlos mismos polimorfismos.
Introducción
El análisis de la molécula de DNA constituye una herramienta muy valiosa que ha permitido delinear estrategias aplicadas a la investigación básica y al diagnostico de innumerables entidades de origen genético, basado esto en el principio que la molécula de DNA es única en cada individuo y que contiene la información necesaria para el desarrollo yfunción de los organismos.
El DNA puede ser extraído de muchos tipos de materiales biológicos (sangre, tejido, hueso, etc.) y el éxito del análisis molecular depende de su adecuado aislamiento en términos de calidad, cantidad y pureza; es necesario separar el DNA del resto de los componentes celulares así como del material no biológico que pueda estar presente. Los protocolos de buscan, en general,eliminar potentes inhibidores de reacciones de amplificación PCR tales como DNAsas, RNAsas y grupos hemo, que dificulten análisis posteriores.
La extracción del ADN es el primer paso para el posterior análisis de este, existen muchos métodos para la extracción de ADN de acuerdo al tipo celular que lo posea, ya sean plantas, animales o bacteria. El proceso general para aislar el DNA genómicoinvolucra los siguientes pasos fundamentales: primero, es necesario homogeneizar las células y distar los núcleos de los cuales se extrae el DNA. Luego se deben realizar procesos de digestión, por lo cual se requiere un medio de extracción debe contener un detergente, como el SDS, buffer TE (compuesto por Tris y EDTA) y proteinasa K, que sirven para lisar los núcleos y liberar el DNA al emulsionarlos lípidos de las membranas celulares y romperlas. En segundo lugar, se debe separar el DNA de materiales contaminantes, como RNA y proteína con el agregado de sales, soluciones amortiguadoras, fenol y cloroformo; para ello se realiza una extracción orgánica. Las sales aumentan la solubilidad del DNA, generando un apantallamiento de cargas. Entre las más utilizadas se encuentra el LiCl, ya queofrece mayor eficiencia de obtención de ADN al generar un mayor apantallamiento de cargas gracias a su pequeño tamaño pequeño. El fenol y el cloroformo son desnaturalizantes activos de proteínas que suprimen la solubilidad de las mismas en la preparación y las precipitan. Puesto que el fenol y la solución salina amortiguadora no se mezclan, solo se requiere realizar centrifugaciones para obtener unaseparación de fases, permaneciendo el DNA (y el RNA) en la fase acuosa superior y las proteínas presentes como un precipitado concentrado en la interfase. La fase acuosa se retira del tubo y se somete a ciclos repetidos de agitación con fenol y centrifugación hasta agotar toda la proteína de la solución. Parte del RNA precipita, pero siempre quedan cantidades detectables de esta molécula, a menosque se utilicen RNAsas durante el proceso de extracción. Finalmente, el DNA purificado se suele concentrar mediante precipitaciones alcohólicas. El cambio de polaridad del medio que genera el agregado de alcohol y la disminución de la temperatura vuelven insoluble al DNA, pudiéndose recuperar en un precipitado si es centrifugado a altas velocidades. Una vez realizada la extracción se debe...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.