Homogenización De Tejidos Vegetales

MEMORIA DE PRÁCTICAS
PRÁCTICA 1
HOMOGENIZACIÓN DE TEGIDOS VEGETALES

En esta práctica hemos separado pigmentos fotosintéticos de tejidos vegetales mediante dos sistemas: extracción simple (o reparto entre solventes inmiscibles) y cromatografía en capa fina con la intención de separar los diferentes pigmentos de una manera sencilla.
Los pigmentos se encuentran en el cloroplasto, en lamembrana de los tilacoides.
La extracción de pigmentos de las células se ha de hacer con solventes adecuados. Los compuestos orgánicos no son solubles en agua, por lo que utilizaremos los llamados solventes extractantes, que extraen, como su propio nombre indica, todos los pigmentos y todos los compuestos orgánicos del interior de la célula. En este caso utilizamos la acetona 100%, aunque también elalcohol etílico es de este tipo.(recordemos : semejante disuelve a semejante)
La cromatografía también ha de hacerse con el solvente adecuado. En este caso uno separador, (para separar los pigmentos) que será el éter de petróleo.
La acetona y el éter son miscibles, pero se vuelven inmiscibles con el agua. Para demostrarlo hemos hecho un pequeño experimento mezclando ambos y después añadiendo agua.En la foto aparece la capa superior en verde porque el tubo de ensayo estaba sucio, debería ser incolora y apreciarse una fina película entre ambas, pero de esta manera se aprecia muy bien que son inmiscibles. Quedando la acetona disuelta con el agua abajo y el éter de petróleo arriba.

Para realizar la práctica hemos utilizado el siguiente material: Hojas de espinaca.- Mortero - Embudo -Matraz - Papel de filtro para el embudo - Tubo de ensayo – Acetona 100% - Eter de petróleo - Pipeta 10 mL.- Propipeta.

PROCEDIMIENTO
EXTRACCIÓN SIMPLE
1. Pesamos 1g de hoja de espinaca lavada y sin nervios y la trituramos en el mortero con 10ml de acetona 100% que iremos agregando poco a poco, hasta conseguir un fluido verde oscuro, donde tendremos los pigmentos. Cuanto más oscura sea elextracto mejor, ya que contendrá más.
2. Con un papel de filtro y un embudo filtraremos el extracto en un recipiente
3. Añadir 3ml de éter de petróleo ( ¡OJO! Yo añadí por error 4 ml, pero no interfirió en el resultado).
4. Añadir 3ml de agua, mezclar y dejar reposar. Observamos cómo se ha separado en dos fases, una superior verde donde encontramos el éter, los carotenos y laclorofila a; y la inferior amarilla donde aparecen la acetona mezclada con el agua, la xantofila y la clorofila b

Es importante respetar el orden de los compuestos, ya que de añadirlos en otro orden pueden alterarse las fases, como en esta imagen, donde se aprecia el éter abajo y la acetona con el agua encima:

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Tiene dos fases:
* FASE FIJA: es una tira de papel defiltro rectangular sobre la que se realiza el proceso. En un lado y con un margen de uno o dos centímetros trazamos una línea a lápiz. Con un capilar depositamos el extracto sobre la línea
* FASE MÓVIL: Éter de petróleo (solvente separador)
Los solventes separadores nos ayudan a separar unos compuestos de otros al presentar distinta afinidad por ellos.
Ayuda a separar por su polaridad.Recordemos que la polaridad en un compuesto químico se debe a la acumulación de cargas.

En función de cómo se disuelvan los componentes:

+POLAR: Clob
Cloa
Xantofila
+APOLAR: Carotenos
Introducimos en un recipiente el papel de filtro con el extracto para la cromatografía y vertemos el éter de petróleo sin que llegue a la marca de lápiz. En el momento se ve comoempieza a correr hacia arriba.

Los pigmentos más polares se retendrán más en la fase estacionaria, mientras que los más apolares avanzarán más rápido junto con la fase móvil.
Pasados unos minutos detenemos el proceso y observamos el resultado:

Aunque la imagen se vea un poco oscura, se aprecia claramente arriba una banda naranja que corresponde al caroteno, una banda amarilla por encima...